糖原含量試劑盒說明書
分光光度法50管/48樣
注 意 ：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
糖原含量試劑盒測(cè)定意義：
糖原是由葡萄糖單位構(gòu)成的高分子多糖，是糖的主要的儲(chǔ)存形式之一，主要貯存在肝和肌肉中作為備用能量，分別稱為肝糖原和肌糖原。肝糖原可調(diào)節(jié)血糖濃度，當(dāng)血糖升高時(shí)可在肝臟合成糖原，血糖降低時(shí)，肝糖原則分解為葡萄糖以補(bǔ)充血糖。因此，肝糖原對(duì)維持血糖的相對(duì)平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的儲(chǔ)存形式,在劇烈運(yùn)動(dòng)消耗大量血糖時(shí)，肌糖原不能直接分解成血糖，必須先分解產(chǎn)生乳酸,隨血液循環(huán)到肝臟,通過糖異生轉(zhuǎn)變?yōu)楦翁窃蚱咸烟恰?/span>
測(cè)定原理：
蒽酮法。利用強(qiáng)堿性提取液提取糖原，在強(qiáng)酸性條件下利用蒽酮顯色劑測(cè)定糖原含量。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、濃硫酸（不允許快遞）和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：0.1mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液 10mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶， 4℃保存；
糖原提取：
1﹑細(xì)胞或細(xì)菌：收集500~1000萬細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；加入0.75mL提取液超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；轉(zhuǎn)移至10mL試管中，95℃水浴20min（蓋緊，防止水分散失），隔5min振搖試管1次，使充分混勻；取出試管冷卻后，用蒸餾水定容到5ml，混勻，8000g 25℃離心10min，取上清液待測(cè)。
2﹑組織：稱取0.1~0.2g樣品，加入0.75ml提取液充分勻漿；轉(zhuǎn)移至10ml試管中；95℃水浴20min（蓋緊，防止水分散失），隔5min振搖試管1次，使充分混勻；待組織全部溶解后，取出試管冷卻后，用蒸餾水定容到5ml，混勻，8000g 25℃離心10min，取上清液待測(cè)。
糖原含量試劑盒步驟和加樣表：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至620nm，蒸餾水調(diào)零。
2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95℃。
3、試劑二工作液的配制：在試劑二中倒入10mL蒸餾水，緩慢倒入40mL濃硫酸，充分溶解混勻后使用；用不完的試劑4℃保存一周；
4、加樣表（在EP管中反應(yīng)）：
試劑（μL） | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測(cè)定管 |
糖原提取液 |
|
| 250 |
試劑一 |
| 250 |
|
蒸餾水 | 250 |
|
|
試劑二 | 1000 | 1000 | 1000 |
混勻，95℃水浴10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻，于620nm波長(zhǎng)處，以蒸餾水調(diào)零，分別讀取空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管吸光度，分別記為A1、A2和A3。
注意：1、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要測(cè)一次。
2、 如果A3-A1大于2，需要將樣本用蒸餾水稀釋，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
糖原含量的計(jì)算：
1、按照樣本質(zhì)量計(jì)算
糖原（mg/g鮮重）＝1.11×(C標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)= 0.555×(A3-A1)÷（A2-A1)÷W
2、按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算
糖原(mg/mg prot)＝1.11×(C標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)=0.111×(A3-A1) ÷（A2-A1) ÷Cpr
1.11：是此法測(cè)得葡萄糖含量換算為糖原含量的常數(shù)，即111ug糖原用蒽酮試劑顯色相當(dāng)于100ug葡萄糖用蒽酮所試劑顯示的顏色；C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.1mg/mL；V1：加入反應(yīng)體系中糖原提取液體積，0.25mL；V2：加入提取液體積，5mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。
注意：最低檢測(cè)限為10ng/g鮮重或0.1ng/ mg prot。
關(guān)鍵字： 糖原含量試劑盒;糖原含量試劑盒;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國(guó)內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
公司在重視產(chǎn)品質(zhì)量的同時(shí)，也建立了一套集技術(shù)支持，物流售后服務(wù)等多部門聯(lián)動(dòng)服務(wù)體系，努力把我們方便、快捷、周到的服務(wù)提供給每一個(gè)客戶，雅吉生物的試劑盒，在國(guó)內(nèi)眾多重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣泛使用，深受廣大科研人員好評(píng)，先后在權(quán)威雜志文章中被引用。
本公司鄭重承諾：質(zhì)量保證、供貨及時(shí)、服務(wù)周到。