淀粉脫分支酶（Starch debranching enzyme，DBE）試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法50管/24樣
注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
DBE能夠?qū)Ｒ恍缘亓呀庵ф湹矸鄣摩?/span>-1，6糖苷鍵，產(chǎn)生線(xiàn)性的葡萄糖鏈，在調(diào)整支鏈淀粉分子的鏈長(zhǎng)方面有重要的作用。
淀粉脫分支酶（Starch debranching enzyme，DBE）試劑盒測(cè)定原理
采用3，5-二硝基水楊酸法測(cè)定DBE催化支鏈淀粉產(chǎn)生的還原糖，通過(guò)測(cè)定還原糖含量的變化來(lái)計(jì)算DBE活性。
需自備的的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體15mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1支，4℃保存；臨用前每支加入6mL試劑一，充分混勻后備用；用不完的試劑4℃保存；
試劑三：液體12mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：液體35mL×1瓶，4℃保存。
淀粉脫分支酶（Starch debranching enzyme，DBE）試劑盒粗酶液提取
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到540 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表
試劑名稱(chēng)（μL） | 對(duì)照管 | 測(cè)定管 |
95℃水浴5min后滅活的樣本 | 200 |
|
粗酶液 |
| 200 |
試劑一 | 200 |
|
試劑二 |
| 200 |
混勻，37℃準(zhǔn)確保溫2h
混勻，95℃水浴5min，于1mL玻璃比色皿540nm處讀取各管吸光值。ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)個(gè)一個(gè)對(duì)照管。
注 意：可以在不同對(duì)照管中加入不同樣品的粗酶液，然后集中進(jìn)行5min 95℃沸水浴處理。
淀粉脫分支酶（Starch debranching enzyme，DBE）試劑盒DBE活力單位的計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)條件測(cè)定回歸方程為y = 3.8458x - 0.165；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白每h催化產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
DBE活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=0.26× (ΔA+0.165) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
DBE活力(mg /min /g鮮重)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V反總]÷(W× V樣÷V樣總)÷T
=0.26× (ΔA+0.165) ÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.4mL； V樣：加入樣本體積，0.2mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2 h；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍為0.1mg/mL-1mg/mL。
ΔA線(xiàn)性范圍為0.01-2。
關(guān)鍵字： 淀粉脫分支酶（Starch debran;淀粉脫分支酶（Starch debran;
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