(1)取膽紅素〔含量測定〕項下溶液，照紫外-可見分光光度法測定，在453nm波長處有吸收。

(2)取本品0.1g，置10ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理5分鐘，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，靜置，取上清液作為供試品溶液。另取膽酸、豬去氧膽酸對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗，吸取上述供試品溶液4μl、對照品溶液2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-醋酸-甲醇（20:25:2:3）上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

(3)取牛膽粉對照藥材10mg，加甲醇適量，超聲處理使充分提取，再加甲醇至10ml，搖勻，靜置，取上清液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取〔鑒別〕（2）項下的供試品溶液及上述對照藥材溶液各8μl，分別點于同一硅膠G薄層板上。以甲苯-冰醋酸-水（7.5:10:0.3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

(4)取本品50mg，加水5ml，超聲處理5分鐘。加甲醇至10ml，靜置，取上清液作為供試品溶液。另取?；撬?/a>對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-乙醇-冰醋酸-水（4:1:2:l）為展開劑，展開，取出，晾干，在105℃加熱10分鐘，噴以1％茚三酮乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。[2]

人工牛黃

膽酸對照品溶液的制備取膽酸對照品12.5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加60％冰醋酸溶液使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含膽酸0.5mg）。 標準曲線的制備精密量取對照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml與1ml，分別置具塞試管中，各管加入60％冰醋酸溶液稀釋成1.0ml，再分別加新制的糠醛溶液（l→100）1.0ml，搖勻，在冰浴中放置5分鐘，精密加入硫酸溶液（取硫酸50ml與水65ml混合）13ml，混勻，在70℃水浴中加熱10分鐘，迅速移至冰浴中，放置2分鐘，以相應的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在605nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

測定法取本品0.1g，精密稱定，置50ml量瓶中，加60％冰醋酸溶液適量，超聲處理5分鐘，用60％冰醋酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液各1ml，分別置甲、乙兩個具塞試管中，于甲管中加新制的糠醛溶液1ml，乙管中加水1ml作空白，按標準曲線制備項下的方法，自“在冰浴中放置5分鐘”起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中含膽酸的重量，計算，即得。

本品按干燥品計算，含膽酸（C24H40O50）不得少于13.0％。

膽紅素對照品溶液的制備取膽紅素對照品10mg，精密稱定，置100ml棕色量瓶中，加三氯甲烷80ml，超聲處理使充分溶解，加三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻。精密量取10ml，置50ml棕色量瓶中，用三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含膽紅素20μg）。

標準曲線的制備精密吸取對照品溶液4ml、5ml、6ml、7ml與8ml，分別置25ml棕色量瓶中，用三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，照紫外-可見分光光度法，在453nm處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

測定法取本品80mg，精密稱定，置100ml棕色量瓶中，加三氯甲烷80ml超聲處理使充分溶解，用三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，在453nm波長處測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中含膽紅素的重量，計算，即得。

本品按干操品計算，含膽紅素（C33H36N4O6）不得少于0.63％。