一、細胞基本屬性

細胞名稱：人惡性黑色素瘤細胞

細胞別稱：A-375; A 375; A375; A375-MEL; A375-mel; A375mel

細胞貨號：SNL-065

細胞種屬：人

生長情況：貼壁

培養(yǎng)條件：H-DMEM+10%FBS+1%雙抗

培養(yǎng)環(huán)境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

二、細胞培養(yǎng)操作

換液周期：2-3天

培養(yǎng)基體積：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

傳代比例：1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

傳代方法：

1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；

2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s，吸走潤洗的PBS；

3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層；

4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；

5.消化到細胞間隙變大，但未完全脫落時加2-3ml完全培養(yǎng)基終止胰酶消化；

6.混勻細胞，900rpm離心3-5min，棄上清；

7.加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；

8.補足完全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；

注意事項：不同品牌胰酶消化時間差別較大，注意嚴格控制消化時間

消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。

三、細胞凍存操作

凍存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);

凍存規(guī)格：200-300萬/ml，1ml每管

凍存方法：

1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；

2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管；

3.將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存

注意事項：凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案

Tips：

1.細胞培養(yǎng)時可能會有部分黑點，屬正常現(xiàn)象，具體原因參見培養(yǎng)操作說明2、3條；

我們推薦使用尚恩生物A-375（人惡性黑色素瘤細胞）專用完全培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號：SNLM-065）作為體外培養(yǎng)A-375（人惡性黑色素瘤細胞）的培養(yǎng)基。