一、細(xì)胞基本屬性

細(xì)胞名稱：人肺巨細(xì)胞癌細(xì)胞（低轉(zhuǎn)移）

細(xì)胞別稱：95C

細(xì)胞貨號：SNL-168

細(xì)胞種屬：人

生長情況：貼壁

培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1%雙抗

培養(yǎng)環(huán)境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

換液周期：2-3天

培養(yǎng)基體積：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

傳代比例：1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定）

傳代方法：1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；

2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細(xì)胞10-20s，吸走潤洗的PBS；

3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層；

4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；

5.消化到細(xì)胞間隙變大，但未完全脫落時加2-3ml完全培養(yǎng)基終止胰酶消化；

6.混勻細(xì)胞，900rpm離心3-5min，棄上清；

7.加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；

8.補足完全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；

注意事項 不同品牌胰酶消化時間差別較大，注意嚴(yán)格控制消化時間

消化傳代細(xì)胞時吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。

三、細(xì)胞凍存操作

凍存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);

凍存規(guī)格：200-300萬/ml，1ml每管

凍存方法：

1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；

2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；

3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存

注意事項 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案

Tips：

1.細(xì)胞培養(yǎng)時黑點可能會比較多，具體原因參見培養(yǎng)操作說明2、3條；

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