"Lu-99A:人大細胞肺癌復(fù)蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長：貼壁

可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)HAO與不HAO至關(guān)重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺HAO的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞不行了，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非常肯定地說，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣的，大家爭取做到因材施教，比如試試下面的“四步消化法”。（以難消化細胞為例），具體操作：1)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍（目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉）。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更HAO一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了）3)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體，加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比)4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據(jù)實際情況把握）。

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

HOS細胞類似產(chǎn)品：：S16細胞、COLO680N細胞、MIA-PaCa-2細胞

THEECs細胞類似產(chǎn)品：：SK-N-BE2細胞、NTC200細胞、L-5178-Y-R細胞

Th17細胞類似產(chǎn)品：：MIN-6細胞、SHIN3細胞、Eph4 1424細胞

PC.3細胞類似產(chǎn)品：：SK-NM-C細胞、AZ 521細胞、SK-NM-C細胞

[細胞產(chǎn)品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

Lu-99A:人大細胞肺癌復(fù)蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

RSC96細胞類似產(chǎn)品：：PG [Human lung carcinoma]細胞、H-322細胞、Y 1細胞

GM15452細胞類似產(chǎn)品：：Hs 343.T細胞、Human Hepatocyte Line 5細胞、COLO 320細胞

3LL細胞類似產(chǎn)品：：HT-22細胞、PA-TU S細胞、SH-SY5Y Parental細胞

培養(yǎng)細胞的凍存及復(fù)蘇：細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細胞凍存在-１９６℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融。【凍存細胞】１)選對數(shù)增生期細胞(證明無支原體污染)，在凍存前１d換液；２)按常規(guī)方法把培養(yǎng)細胞制備成懸液，計數(shù)，使細胞密度達５×１０／ml左右密度，離心，去上清；３)加入配制HAO的凍存液(培養(yǎng)液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養(yǎng)液中加入保護劑１０％二甲基亞砜(DMSO)或甘油，可使冰點降低，使細胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細胞外；４)分裝于無菌凍存管中，每管加１.５m懸液；５)旋HAO凍存管并仔細檢查，一定要蓋緊，做HAO標記；６)凍存：在殊的儀器或簡易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min時間內(nèi)，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度，過快能影響細胞內(nèi)水分透出，太慢則促進冰晶形成。操作時應(yīng)戴防護眼鏡和手套，以免液氮凍傷?！緩?fù)蘇細胞】１)從罐中取出凍存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不時搖動，使其急速融化，３０～６０s內(nèi)完成；３)凍存管用７０％酒精擦拭消毒后，打開蓋子，用吸管將細胞懸液注入離心管中，再滴加１０ml培養(yǎng)液；４)低速離心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培養(yǎng)液洗一次；５)用培養(yǎng)液適當稀釋后，裝入培養(yǎng)瓶３７℃培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后，繼續(xù)培養(yǎng)。以后仍按常規(guī)進行培養(yǎng)。凍存細胞數(shù)量要充分，密度應(yīng)達到１０／ml，在融后稀釋２０倍時，仍能保持５×１０／ml數(shù)量。

細胞傳代方法：１：１０傳代

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

Lu-99A:人大細胞肺癌復(fù)蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長特性：貼壁生長

貼壁細胞傳代：去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次；棄PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細胞，顯微鏡下觀察，待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開始脫離瓶壁，加4 ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化，將細胞小心吹打下來，1000rpm/min室溫離心5min；棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8），每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。懸浮細胞傳代：一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，將細胞懸液移入離心管中，1000rpm/min 室溫離心5min。棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:4-1:8），每T25瓶加完全培養(yǎng)液至4-5ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細胞趨于成團生長，此時細胞生長狀態(tài)良HAO，當補液時，需避免反復(fù)吹打。

LNCaP subline C4-2細胞類似產(chǎn)品：：Swiss3T3細胞、SK_HEP1細胞、CHO/dhFr-細胞

BMF細胞類似產(chǎn)品：：TK10細胞、SW 1990細胞、N9細胞

SUD6細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H1623細胞、RCS細胞、Walker-256-TC細胞

FHL-124細胞類似產(chǎn)品：：SK-MEL3細胞、SkChA-1細胞、LUDLU1細胞

H-1105細胞類似產(chǎn)品：：UWB1289細胞、Pt K2 (NBL-5)細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-330細胞

SW-1417細胞類似產(chǎn)品：：Jurkat FHCRC細胞、NCI-H889細胞、JURKAT E-6.1細胞

LS180細胞類似產(chǎn)品：：SW982細胞、MDA-MB453細胞、Hs 294T細胞

HLF-a細胞類似產(chǎn)品：：TW01細胞、MDAMB330細胞、COLO.205細胞

NCI.H522細胞類似產(chǎn)品：：PG-4 (S+L-)細胞、GM03573A細胞、NS1-1 Ag4.1細胞

H-1373細胞類似產(chǎn)品：：HCO細胞、CHP 212細胞、MCFs細胞

H719細胞類似產(chǎn)品：：CAL-78細胞、MV411細胞、HuT 78細胞

ZR75_1細胞類似產(chǎn)品：：AML193細胞、CCC-ESF-1細胞、RPMI 2650細胞

JurkatE6-1細胞類似產(chǎn)品：：Walker-256-TC細胞、NR8383.1細胞、28SC細胞

hTERT-RPE1細胞類似產(chǎn)品：：Hs821T細胞、STTG1細胞、DR2R 1610細胞

Human Foreskin Fibroblast細胞類似產(chǎn)品：：STC-1細胞、LoMeT-ccRcc細胞、H-1882細胞

HB611細胞類似產(chǎn)品：：HTR8/SVneo細胞、Human Kidney-2細胞、HCFB（HCF）細胞

T84細胞類似產(chǎn)品：：A-2780細胞、KU 812細胞、GTL16細胞

Ha Fe細胞類似產(chǎn)品：：HCC1008細胞、AN3CA細胞、OVCAR.8細胞

PA12細胞類似產(chǎn)品：：R-1059-D細胞、Tadarida brasiliensis 1 lung細胞、EMT-6細胞

U-118 MG細胞類似產(chǎn)品：：DH82細胞、NTHY-ORI3.1細胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-3細胞

Ls-174-T細胞類似產(chǎn)品：：H87細胞、MC-CAR細胞、RMS13細胞

MonoMac 6細胞類似產(chǎn)品：：MDA-MB-231-luc細胞、LA795細胞、AMC-HN-8細胞

MM-1S細胞類似產(chǎn)品：：C12細胞、Human Embryonic Skin細胞、G 292 Clone A 141B1細胞

HT-22細胞類似產(chǎn)品：：HCC 70細胞、Lewis lung carcinoma line 1細胞、Walker 256細胞

Lu-99A:人大細胞肺癌復(fù)蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

RBMEC細胞類似產(chǎn)品：：mRTEC細胞、Hs 729細胞、Ramos(RA1)細胞

C57 Mouse Tumor 93細胞類似產(chǎn)品：：Ramos(RA1)細胞、HeLa-229細胞、Sf21細胞

HOS細胞類似產(chǎn)品：：S16細胞、COLO680N細胞、MIA-PaCa-2細胞

H292細胞類似產(chǎn)品：：SNU620細胞、BALB/3T3 clone A31細胞、NCI-H157細胞

Panc04.03細胞類似產(chǎn)品：：NK92細胞、NF639細胞、Rabbit Kidney 13細胞

DoTc2 4510細胞類似產(chǎn)品：：COLO201細胞、SACC-83細胞、T-47-D細胞

CCD-841-CoTr細胞類似產(chǎn)品：：MEF (CF-1)細胞、LS513細胞、HCoEpiC細胞

UACC 893細胞類似產(chǎn)品：：M2-10B4細胞、RT-BM-1細胞、293S細胞

Human Epidermoid carcinoma #2細胞類似產(chǎn)品：：HCC1569細胞、NBL-4細胞、NS20Y細胞

SK-NM-C細胞類似產(chǎn)品：：HUVSMC細胞、WM 2664細胞、SO-Rb 50細胞

CL-40細胞類似產(chǎn)品：：HNE-3細胞、HIBEC細胞、NG108-15細胞

U-266細胞類似產(chǎn)品：：EA.hy 926細胞、NCI H508細胞、HCC-1500細胞

MV-1-Lu細胞類似產(chǎn)品：：BIU-87/Adr細胞、NOZC-1細胞、T 98 G細胞

H-187細胞類似產(chǎn)品：：Hs27F細胞、MDA-MB468細胞、JTC-39細胞

COLO-320-HSR細胞類似產(chǎn)品：：OVCA 433細胞、TERT-RPE1細胞、RPTEC/TERT1細胞

Leukemic 1210細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H2108細胞、H-1693細胞、Co320細胞

LK 2細胞類似產(chǎn)品：：MZ-CRC-1細胞、LADMAC細胞、J774 A1細胞

Mono-Mac-1細胞類似產(chǎn)品：：ssMCF7細胞、ATC241細胞、Normal Rat Kidney細胞

Fetal Rhesus Kidney-4細胞類似產(chǎn)品：：IGR-OV1細胞、HOS TE85細胞、LAN-6細胞

D341Med細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H2405細胞、U20S細胞、MDA-MB-157細胞

SW 1116細胞類似產(chǎn)品：：WM239A細胞、PF382細胞、MCF-12A細胞

HNTEC細胞類似產(chǎn)品：：MES-SA細胞、NRK clone 52E細胞、MCM細胞

BE(2)M-17細胞類似產(chǎn)品：：P3X63 AG8-653細胞、GM00637B細胞、50.B1細胞

HSAS1細胞類似產(chǎn)品：：hEM15A細胞、NSH細胞、rHSC-99細胞

UMUC-3細胞類似產(chǎn)品：：P388D1細胞、Psi-2 DAP細胞、MOLT 16細胞

HMEC1細胞類似產(chǎn)品：：LTEP-sm 1細胞、PCI-4B細胞、MDA-MB-134 VI細胞

SU-DHL2細胞類似產(chǎn)品：：HCoEpiC細胞、Oka-C1細胞、TMD8細胞

RT4細胞類似產(chǎn)品：：U-118-MG細胞、OLN 93細胞、SVOG細胞

NFS-60細胞類似產(chǎn)品：：Hs-600-T細胞、MeSoTheliOma-211H細胞、293 H細胞

BC3H1細胞類似產(chǎn)品：：T9細胞、OC 316細胞、NS-20Y細胞

GA-10-Clone-4細胞類似產(chǎn)品：：MGH-U3細胞、NCIH2135細胞、SKLMS-1細胞

HOSEpiC細胞類似產(chǎn)品：：Toledo細胞、Hs-27細胞、P-36細胞

Nthy-ori 3-1細胞類似產(chǎn)品：：Hs 636 T細胞、LYR細胞、L 929細胞

HC11細胞類似產(chǎn)品：：MM6細胞、HEC-251細胞、NUGC4細胞

CAMA-1細胞類似產(chǎn)品：：Human Microglia Clone 3細胞、PC3M-IE8細胞、WERI細胞

PNT1A細胞類似產(chǎn)品：：RPE-1細胞、SKO-007細胞、NCI-H28細胞

WEHI3B細胞類似產(chǎn)品：：OS-732細胞、University of Michigan-Urothelial Carcinoma-1細胞、UMUC-14細胞

SUD6細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H1623細胞、QBI-293A細胞、CAL-78細胞

CCD-966SK細胞類似產(chǎn)品：：P3X63Ag8653細胞、H-1836細胞、PJ34細胞

MV 3細胞類似產(chǎn)品：：MDAMB361細胞、UCLA SO M21細胞、Stanford University Pediatric T-cell line 1細胞

OVCA 433細胞類似產(chǎn)品：：Japanese Tissue Culture-28細胞、HPAF-II細胞、H-1944細胞

SVG(P12)細胞類似產(chǎn)品：：BPH1細胞、NCI-SNU-886細胞、COLO320-DM細胞

HeLaS3細胞類似產(chǎn)品：：KP-N-RT-BM細胞、HCC0202細胞、AC29細胞

HUVEC細胞類似產(chǎn)品：：QG-56細胞、HCC0078細胞、CL1-5細胞

Jurkat E6細胞類似產(chǎn)品：：JHH-2細胞、P3J-HR-1細胞、MOLM13細胞

F81細胞類似產(chǎn)品：：UPCI-SCC-90細胞、Natural Killer-92細胞、BHK21細胞

HR8348細胞類似產(chǎn)品：：DHL10細胞、LS174T細胞、DMS153細胞

RD-2細胞類似產(chǎn)品：：Hs 675.T細胞、MDA453細胞、MES-13細胞

Hs 840.T細胞類似產(chǎn)品：：SUIT-2細胞、HCC-2279細胞、Human Liver-7702細胞

AtT 20細胞類似產(chǎn)品：：HN13細胞、A549/ATCC細胞、MCF7/WT細胞

SK-MEL-3細胞類似產(chǎn)品：：HBZY-1細胞、GM07404D細胞、Strain L-929細胞

Mv1.Lu細胞類似產(chǎn)品：：MDA-MB-361細胞、H1975細胞、P3X63細胞

32D clone 3細胞類似產(chǎn)品：：A875細胞、MDA231-LM2細胞、N-9細胞

H735細胞類似產(chǎn)品：：Hs 934.T細胞、IPLB-Sf21AE細胞、CAL 12細胞

Hs706T細胞類似產(chǎn)品：：SR786細胞、JC細胞、Panc02細胞

EA hy 926細胞類似產(chǎn)品：：GM00637B細胞、SUDHL-6細胞、HS-68細胞

HS 683T細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H522細胞、U266細胞、3T3-Swiss細胞

293GP細胞類似產(chǎn)品：：BT.549細胞、H-23細胞、R3/1細胞

Simpson細胞類似產(chǎn)品：：RERFLCMS細胞、TE-9細胞、UMRC-2細胞

C4-I細胞類似產(chǎn)品：：BpRc1細胞、D-341 Med細胞、Hs 888.Lu細胞

SCL II細胞類似產(chǎn)品：：IBRS-2細胞、HO-8910細胞、J774.A1細胞

Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-8細胞類似產(chǎn)品：：AGS細胞、P388.D1細胞、P3X63 AG8-653細胞

FBHE細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H1781細胞、A2780/CP細胞、MHCC97L細胞

LNT-229細胞類似產(chǎn)品：：H1435細胞、MAVER-1細胞、C-33A細胞

AAV-293細胞類似產(chǎn)品：：P19細胞、A1847細胞、HECV細胞

Panc203細胞類似產(chǎn)品：：SCH細胞、HCASMC細胞、Human podocyte細胞

Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-10細胞類似產(chǎn)品：：NHEK細胞、T-HEECs細胞、SV40-MES13細胞

MF2059細胞類似產(chǎn)品：：WM266mel細胞、HBL 100細胞、SU.86細胞

PANC-02-03細胞類似產(chǎn)品：：HEK-293-EBNA細胞、MSTO211H細胞、MeWo細胞

FHL124細胞類似產(chǎn)品：：GCT0404細胞、MADISON LUNG TA-109細胞、HeLa-229細胞

MHCC97細胞類似產(chǎn)品：：SK N SH細胞、BPH1細胞、LN299細胞

IEC6細胞類似產(chǎn)品：：HEK 293-EBNA細胞、COR-L23細胞、ME-180細胞

A375mel細胞類似產(chǎn)品：：SKLMS-1細胞、SGC-7901細胞、JHH2細胞

PLB985細胞類似產(chǎn)品：：Pro-5WgaRI3C細胞、P30-OHKUBO細胞、Panc-05.04細胞

MDA-157細胞類似產(chǎn)品：：SJ-RH30細胞、HES [Human embryonic skin fibroblast]細胞、NCIH820細胞

OCI-AML4細胞類似產(chǎn)品：：HCC-94細胞、F36P細胞、Colo320細胞

Ra No. 1細胞類似產(chǎn)品：：Hs 852.T細胞、Li-7細胞、TCC-SUP細胞

GA-10細胞類似產(chǎn)品：：NIH3T3-L1細胞、HIEC-6細胞、K1細胞

H-1435細胞類似產(chǎn)品：：YD15細胞、H-2135細胞、OCI/AML2細胞

H3255_DA細胞類似產(chǎn)品：：HCS2/8細胞、KPL-4細胞、OCI Ly3細胞

KE-39細胞類似產(chǎn)品：：Hs706T細胞、SUP-B1細胞、T47D:A細胞

NCI-H1838細胞類似產(chǎn)品：：A3細胞、Strain V細胞、B16細胞

Lu-99A:人大細胞肺癌復(fù)蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

HEL-92細胞類似產(chǎn)品：：Hs 737.T細胞、NCIH1184細胞、PT-K75細胞

H2171細胞類似產(chǎn)品：：LS513細胞、293T/17細胞、HSC-4細胞

H-774細胞類似產(chǎn)品：：GM00637細胞、SKNBE細胞、GB-1細胞

LAPC4細胞類似產(chǎn)品：：EVSAT細胞、SNU886細胞、Bovine ENDometrial cells細胞

NCIH1975細胞類似產(chǎn)品：：SW 480細胞、Tb 1 Lu細胞、ME-1 [Human leukemia]細胞

AN-3細胞類似產(chǎn)品：：U373MG細胞、COLO 320細胞、HCM細胞

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