高純質(zhì)粒小提試劑盒
一、產(chǎn)品簡介。
本產(chǎn)品是一款從工程菌內(nèi)大量提取質(zhì)粒 DNA 的試劑盒，并能夠去除蛋白質(zhì)與 RNA，得到高純度的質(zhì)粒 DNA，用于轉(zhuǎn)染和酶切等生物學實驗。
二、運輸與存儲條件。
本試劑盒中的 RNase A 需低溫運輸，-20 ℃保存，其它組份常溫運輸與保存，有效期 12 個月。
三、特點與優(yōu)勢。
1. 有效去除蛋白質(zhì)與 RNA，得到高純度的質(zhì)粒 DNA。
2. DNA 純化柱可結(jié)合 20-30 μg 的質(zhì)粒 DNA。
四、使用說明
1. 試劑配制：
a) Buffer P1 (重懸液) 配制。將 RNase A 全部加入 Buffer P1 中，混勻，4 ℃保存。
b) Buffer W3（漂洗液）配制。溶液中加入 35 mL 無水乙醇，混勻，室溫保存。
2. 細菌收集。利用 15 mL 離心管收集 2-5 mL 菌液，12,000×g 離心 2 min，棄上清。將離心管倒立在紙巾上，吸盡殘余液體，以免影響后續(xù)實驗
3. 加入 250 μL Buffer P1（確定加入 RNase A），振蕩（vortex）至細菌完全重懸。（若細菌沉淀沒有完全重懸，會影響裂解效果，降低質(zhì)粒 DNA 提取量。）
4. 加入 250 μL Buffer P2（室溫較低時，Buffer P2 易沉淀，請在 37 ℃水浴鍋中加熱 10 min，待沉淀消失后再使用），輕柔地上下翻轉(zhuǎn) 20 次，液體變透明，保證細菌充分裂解。（不要劇烈震蕩（vortex），以免 DNA 斷裂。裂解時間不宜超過 5 min，以免質(zhì)粒 DNA 受到破壞。細菌充分裂解后液體變得清亮粘稠。如果仍然渾濁，則細菌過量，裂解不徹底，應加大裂解液用量。）
5. 加入 350 μL Buffer P3，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 20 次，充分混勻，出現(xiàn)白色絮狀沉淀。（混勻要充分，以免出現(xiàn)局部沉淀，影響中和效果。）
6. 12,000×g 離心 10-20 分鐘，上清轉(zhuǎn)入 DNA 純化柱中，12,000×g 離心 30 sec，棄濾液。
7. 剩余的上清液加入相應的 DNA 純化柱, 12,000×g 離心 30 sec，棄濾液。
8. 加入 500 μL Buffer W1（去蛋白液），12,000×g 離心 30 sec，棄濾液。
9. 加入 500 μL Buffer W3（漂洗液），12,000×g 離心 30 sec，棄濾液。
10. 空 DNA 純化柱，12,000×g 離心 2 min，去除 DNA 純化柱中殘余液體。
11. 將 DNA 純化柱轉(zhuǎn)移至新離心管中，在柱中央滴加 100 μL Elusion Buffer D（洗脫液）或 ddH2O，室溫靜置 2 min。
12. 12,000×g離心2 min，收集質(zhì)粒DNA溶液。
13. 測定濃度，或置于-20 ℃冰箱中保存。
五、注意事項
1. 質(zhì)粒提取量與細菌濃度及質(zhì)?？截悢?shù)等因素有關(guān)。低拷貝質(zhì)?；虼笥?0 kb的大質(zhì)粒提取時應加大細菌使用量。
2. 洗脫體積不應小于30 μL，否則降低DNA產(chǎn)量。
3. 為了您的健康，實驗過程中請穿實驗服，并佩戴手套與口罩。
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