雌二醇(E2),也稱(chēng)為雌激素,是一種類(lèi)固醇、一種雌激素,也是主要的女性性激素。它因調(diào)節(jié)雌性動(dòng)物的發(fā)情周期和月經(jīng)周期而得名。雌二醇對(duì)于青春期、成年期和妊娠期女性生殖組織(如乳房、子宮和陰道)的發(fā)育和維持至關(guān)重要,但它在骨骼、脂肪、皮膚、肝臟和大腦等許多其他組織中也有重要影響。盡管男性的雌激素水平低于女性,但雌激素在男性中也有重要功能。雌二醇存在于大多數(shù)脊椎動(dòng)物以及許多甲殼類(lèi)動(dòng)物、昆蟲(chóng)、魚(yú)類(lèi)和其他動(dòng)物物種中。
雌二醇(E2)ELISA試劑盒是一種用于體外定量測(cè)量血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體中雌二醇濃度的ELISA試劑盒。該檢測(cè)具有高靈敏度和優(yōu)異的特異性,用于檢測(cè)雌二醇。未觀察到雌二醇與其類(lèi)似物之間有顯著的交叉反應(yīng)或干擾。
艾美捷雌二醇(E2)ELISA試劑盒:
貨號(hào):abx574169
靶標(biāo):雌二醇(E2)
反應(yīng)性:通用(所有物種)
檢測(cè)應(yīng)用:ELISA
推薦稀釋度:最佳稀釋度/濃度應(yīng)由最終用戶確定。
儲(chǔ)存:運(yùn)輸時(shí)溫度為4°C。收到后,請(qǐng)按照試劑盒說(shuō)明書(shū)中的儲(chǔ)存說(shuō)明進(jìn)行儲(chǔ)存。
有效期:該試劑盒的有效期至少為6個(gè)月。根據(jù)要求可提供長(zhǎng)達(dá)12個(gè)月的有效期。
穩(wěn)定性:試劑盒的穩(wěn)定性由活性損失率決定。在適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存條件下,有效期內(nèi)的損失率小于5%。為了盡量減少性能波動(dòng),操作程序和實(shí)驗(yàn)室條件應(yīng)嚴(yán)格控制。還強(qiáng)烈建議整個(gè)檢測(cè)過(guò)程由同一位用戶完成。
檢測(cè)范圍:7.8 pg/ml - 500 pg/ml
靈敏度:< 2.9 pg/ml
標(biāo)準(zhǔn)品形式:凍干
檢測(cè)方法:比色法
檢測(cè)類(lèi)型:競(jìng)爭(zhēng)法
檢測(cè)數(shù)據(jù):定量
樣本類(lèi)型:血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體。
靶標(biāo)類(lèi)型:抗原
檢測(cè)原理:該試劑盒基于競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)。96孔板上預(yù)先包被有抗體。將標(biāo)準(zhǔn)品、測(cè)試樣本和生物素偶聯(lián)試劑加入到孔中并孵育。生物素標(biāo)記的E2和未標(biāo)記的E2在預(yù)包被抗體上發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)抑制反應(yīng)。然后加入HRP偶聯(lián)試劑,并將整個(gè)板孵育。在每個(gè)階段使用洗滌緩沖液去除未結(jié)合的偶聯(lián)物。使用TMB底物來(lái)定量HRP酶促反應(yīng)。加入TMB底物后,只有含有足夠E2的孔才會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物,加入酸性終止液后變?yōu)辄S色。黃色的強(qiáng)度與板上結(jié)合的E2量成反比。在微孔板讀數(shù)儀中以450 nm波長(zhǎng)光譜光度法測(cè)量OD,從而可以計(jì)算出E2的濃度。
試劑盒組成:列出的試劑盒組成僅供參考。
預(yù)包被的96孔微孔板
標(biāo)準(zhǔn)品
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液
洗滌緩沖液
檢測(cè)試劑A
檢測(cè)試劑B
稀釋液A
稀釋液B
TMB底物
終止液
板封膜
所需但未提供的材料:
37°C培養(yǎng)箱
多通道和單通道移液管及無(wú)菌移液槍頭
噴霧瓶或自動(dòng)微孔板洗滌器
1.5 ml管
蒸餾水
吸水濾紙
100 ml和1升量筒
微孔板讀數(shù)儀(波長(zhǎng):450 nm)
ELISA振蕩器
試劑準(zhǔn)備:此程序僅供參考。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)可能略有不同。產(chǎn)品應(yīng)按照隨產(chǎn)品一起提供的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中的說(shuō)明使用。
標(biāo)準(zhǔn)品:用推薦體積的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液制備標(biāo)準(zhǔn)品溶液。然后按照協(xié)議中的指示,用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行系列稀釋。
洗滌緩沖液:按照協(xié)議中的指示,用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液。
檢測(cè)試劑準(zhǔn)備:計(jì)算所需的工作溶液的總體積。分別用稀釋液A和稀釋液B將檢測(cè)試劑A和檢測(cè)試劑B稀釋1:100。
檢測(cè)程序:此程序僅供參考。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)可能略有不同。產(chǎn)品應(yīng)按照隨產(chǎn)品一起提供的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中的說(shuō)明使用。
設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品、測(cè)試樣本和對(duì)照孔。
將50 µl稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品加入到標(biāo)準(zhǔn)品孔中。
將50 µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液加入到對(duì)照(零)孔中。
將50 µl稀釋后的樣本加入到樣本孔中。
立即向每個(gè)孔中加入50 µl檢測(cè)試劑A。在37°C下孵育1小時(shí)。
洗滌3次。
向每個(gè)孔中加入100 µl檢測(cè)試劑B。在37°C下孵育30分鐘。
洗滌5次。
向每個(gè)孔中加入90 µl TMB底物。在37°C下孵育10-20分鐘。
加入50 µl終止液。
在450 nm處測(cè)量OD。
協(xié)議:
此程序僅供參考。在使用前將試劑盒組分和樣本平衡至室溫(18 - 25 °C)。建議每次測(cè)試?yán)L制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
在預(yù)包被板上分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品、測(cè)試樣本和對(duì)照(零)孔,然后記錄它們的位置。建議每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣本至少重復(fù)測(cè)量?jī)纱巍?/p>
將50 µL的每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照和樣本加入到相應(yīng)的孔中。
移除蓋子并丟棄液體。
立即加入50 µl檢測(cè)試劑A工作溶液。用蓋子封住板,在37°C下孵育1小時(shí)。
移除蓋子并丟棄溶液。用1X洗滌緩沖液洗滌板3次。
向每個(gè)孔中加入100 µL檢測(cè)試劑B工作溶液,封住并孵育37°C 30分鐘。
丟棄溶液并按照前一步驟用洗滌緩沖液洗滌板5次。
向每個(gè)孔中加入90 µl TMB底物。用蓋子封住板,在37°C下孵育10-20分鐘。避免暴露在光下。孵育時(shí)間僅供參考,最佳時(shí)間應(yīng)由最終用戶確定。不要超過(guò)30分鐘。
向每個(gè)孔中加入50 µL終止液。立即在450 nm處讀取。
結(jié)果計(jì)算:該檢測(cè)是競(jìng)爭(zhēng)性的,因此樣本中E2濃度與測(cè)量的吸光度之間存在負(fù)相關(guān)。創(chuàng)建一個(gè)以標(biāo)準(zhǔn)濃度的對(duì)數(shù)(y軸)和平均吸光度(x軸)為坐標(biāo)的圖表。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)應(yīng)用最佳擬合趨勢(shì)線。樣本的E2濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上插值得出。
檢測(cè)精密度:
批內(nèi)精密度(同一批次內(nèi)的精密度):分別在一塊板上測(cè)試3個(gè)低、中、高濃度水平的雌二醇樣本,每個(gè)樣本測(cè)試20次。
批間精密度(不同批次之間的精密度):在3塊不同的板上測(cè)試3個(gè)低、中、高濃度水平的雌二醇樣本,每塊板上測(cè)試8個(gè)重復(fù)樣本。
CV(%)=(標(biāo)準(zhǔn)差/平均值)×100
批內(nèi)精密度:CV<10%
批間精密度:CV<12%
數(shù)據(jù)示例:
圖:顯示雌二醇(E2)標(biāo)準(zhǔn)OD數(shù)據(jù)的圖表
https://www.amyjet.com/products/abx574169.shtml