KLH IgM(小鼠)ELISA試劑盒：KLH IgM（小鼠）ELISA試劑盒用于定量測(cè)量血漿和血清中的KLH IgM。
艾美捷KLH IgM(小鼠)ELISA試劑盒：
貨號(hào)：KA2461
校準(zhǔn)范圍：6.25至100 µg/mL
適用樣本：血漿、血清
樣本體積：100 µL
標(biāo)記：HRP結(jié)合物
檢測(cè)方法：比色法
監(jiān)管狀態(tài)：僅供研究使用（RUO）
測(cè)定類型：定量
反應(yīng)性：小鼠
應(yīng)用：定量
儲(chǔ)存說(shuō)明：將凍干標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)存于-20℃。將所有其他組分儲(chǔ)存于4℃。
僅供研究使用（RUO）
KLH IgM(小鼠)ELISA試劑盒檢測(cè)原理：
KLH IgM（小鼠）ELISA試劑盒基于固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。該測(cè)定使用KLH進(jìn)行固相（微量滴定孔）固定和辣根過(guò)氧化物酶（HRP）偶聯(lián)用于檢測(cè)抗小鼠IgM抗體。將測(cè)試血清或血漿樣本稀釋并在微量滴定孔1小時(shí)。隨后洗滌微量滴定孔，加入HRP綴合物孵育45分鐘。因此，抗KLH IgM分子夾在固定的KLH和檢測(cè)抗體偶聯(lián)物。然后洗滌孔以去除未結(jié)合的HRP標(biāo)記抗體，以及加入TMB試劑，在室溫下孵育20分鐘。這導(dǎo)致了藍(lán)色。通過(guò)添加終止溶液來(lái)停止顯色；將顏色更改為黃色。光學(xué)在450nm處用分光光度法測(cè)量密度?？筀LH IgM的濃度與測(cè)試樣品的光密度。
使用注意事項(xiàng)：
? 僅供研究使用，不用于診斷目的。
? 在使用試劑盒之前，請(qǐng)仔細(xì)閱讀并理解說(shuō)明書。
? 本試劑盒設(shè)計(jì)用于測(cè)量免疫后5天收集的血清中的抗KLH IgM水平。免疫后超過(guò)5天收集的血清可能含有高水平的抗KLH IgG，這些IgG會(huì)與抗KLH IgM競(jìng)爭(zhēng)固定化的KLH，從而造成干擾。
? 所有試劑在使用前應(yīng)放置至室溫（25℃）。
? 應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定最佳樣本稀釋度。然而，我們建議初次稀釋樣本500倍。請(qǐng)勿使用小于25倍的稀釋度。
? 如果在每個(gè)步驟中，試劑在5分鐘內(nèi)加入微孔板的孔中，則可獲得最佳結(jié)果。
? 操作限制
• 當(dāng)按照上述詳細(xì)說(shuō)明完整理解并執(zhí)行測(cè)定程序時(shí)，將獲得可靠且可重復(fù)的結(jié)果。
• 洗滌步驟至關(guān)重要。洗滌不足會(huì)導(dǎo)致精密度差和吸光度讀數(shù)虛高。
試劑準(zhǔn)備：
? 洗滌液準(zhǔn)備
提供的洗滌液為20倍濃縮液。使用前，將瓶中內(nèi)容物（50 mL）用950 mL蒸餾水或去離子水稀釋。
? 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備
小鼠抗KLH IgM標(biāo)準(zhǔn)品為凍干儲(chǔ)備液。按照瓶簽上的說(shuō)明復(fù)溶儲(chǔ)備液。
標(biāo)記5個(gè)聚丙烯或玻璃管，分別為100、50、25、12.5和6.25 µg/mL。
按照儲(chǔ)備瓶標(biāo)簽上的詳細(xì)說(shuō)明，在標(biāo)記為100 µg/mL的管中準(zhǔn)備100 µg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品。
將稀釋液250 µL分別加入剩余的管中。
通過(guò)將100 µg/mL標(biāo)準(zhǔn)品250 µL與標(biāo)記為50 µg/mL的管中的250 µL稀釋液混合稀釋，制備50 µg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品。
同樣通過(guò)連續(xù)稀釋法制備25、12.5和6.25 µg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品。
樣本準(zhǔn)備：
一般說(shuō)明：抗KLH IgM存在于KLH免疫小鼠的血清中，濃度約為10,000 µg/mL。為了獲得在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)的數(shù)值，我們建議樣本初次稀釋500倍，使用以下程序?qū)γ總€(gè)待測(cè)樣本進(jìn)行操作：
分別向不同的管中加入48 µL和237.5 µL稀釋液。
將2 µL血清/血漿樣本加入含有48 µL稀釋液的管中，混勻。這提供了25倍稀釋的樣本。
將12.5 µL 25倍稀釋的樣本與第二管中的237.5 µL稀釋液混合。這提供了樣本的500倍稀釋。
對(duì)每個(gè)待測(cè)樣本重復(fù)此程序。
典型標(biāo)準(zhǔn)曲線：
下圖展示了以450 nm處的吸光度讀數(shù)為Y軸，抗KLH IgM濃度為X軸的典型標(biāo)準(zhǔn)曲線。該曲線僅用于說(shuō)明目的，不應(yīng)用于計(jì)算未知數(shù)。
KLH IgM(小鼠)ELISA試劑盒文獻(xiàn)參考：
1. Low-dose influenza vaccine Grippol Quadrivalent with adjuvant Polyoxidonium induces a T helper-2 mediated humoral immune response and increases NK cell activity. Vladimir Talayev, Irina Zaichenko, Maria Svetlova, Alexei Matveichev, Olga Babaykina, Elena Voronina, Andrei Mironov. Vaccine. 2020 Sep 29;38(42):6645-6655. doi:10.1016/j.vaccine.2020.07.053.
2. Pancreatic lipase-related protein 2 is responsible for the increased hepatic retinyl ester hydrolase activity in vitamin A-deficient mice. Gao Y, Lu W, Sun Q, Yang X,Liu J, Ge W, Yang Y, Zhao Y, Xu X, Zhang J. FEBS J.2019 Jun 14. [Epub ahead of print]
https://www.amyjet.com/products/KA2461.shtml