產(chǎn)品概述:T7 RNA聚合酶是一種來(lái)源于T7噬菌體的一種依賴于DNA的RNA聚合酶,具有DNA聚合酶活性和較強(qiáng)的3´→5´核酸外切酶活性。T7 RNA聚合酶對(duì)T7啟動(dòng)子具有較高的特異性,能夠以T7啟動(dòng)子下游序列為模板合成大量的RNA。
運(yùn)輸與保存方法:≤0℃運(yùn)輸;-25~-15℃保存。
單位定義:在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下,37℃1 h內(nèi)將1 nmol的ATP摻入酸性不溶物所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位(U)。
質(zhì)量控制
核酸內(nèi)切酶殘留檢測(cè):50μL反應(yīng)體系中加入50 U本酶和1μgλDNA在37℃下孵育16 h,瓊脂糖凝膠電泳DNA譜帶不發(fā)生變化。
核酸外切酶殘留檢測(cè):50μL反應(yīng)體系中加入50 U本酶1μgλ-Hind III digestDNA在37℃下孵育16 h,瓊脂糖凝膠電泳DNA譜帶不發(fā)生變化。
RNase殘留檢測(cè):40μL反應(yīng)體系中加入40 U本酶和1μg MS2 RNA在37℃下孵育2 h,瓊脂糖凝膠電泳RNA譜帶不發(fā)生變化。
DNase殘留檢測(cè):40μL反應(yīng)體系中加入40 U本酶和4μg pUC19 DNA在37℃下孵育16 h,瓊脂糖凝膠電泳DNA譜帶不發(fā)生變化。
熱失活:75℃,20 min。
反應(yīng)終止:加入2μL 0.2 M EDTA(pH8.0 25℃)或者75°C加熱20 min。
DNA模板去除:可用DNase I(2U)37℃處理15 min。
反應(yīng)抑制劑:金屬離子螯合劑、NaCl和KCl,該酶對(duì)高濃度NaCl或KCl不耐受,當(dāng)其濃度超過150 mM時(shí),活性受到顯著抑制(活性約降低50%)。