煙酰胺單核苷酸通過減輕高滲誘導(dǎo)的角膜上皮細(xì)胞中IL-17a分泌抑制巨噬細(xì)胞活化 背景：高滲應(yīng)激（HS）是干眼癥（DED）發(fā)病的重要病理因素。煙酰胺單核苷酸（NMN）對(duì)角膜損傷有保護(hù)作用，但其在HS誘導(dǎo)的DED中的作用尚不清楚。 方法： 通過高滲NaCl溶液（500mosm）構(gòu)建HS體外模型，并進(jìn)而用于角膜上皮細(xì)胞（CEC）和巨噬細(xì)胞系RAW264.7的共培養(yǎng)體系研究。分析NMN對(duì)CEC內(nèi)NAD+代謝及HS標(biāo)志物TonEBP含量的影響。分別通過臺(tái)盼藍(lán)染色、流式細(xì)胞技術(shù)和乳酸脫氫酶（LDH）檢測(cè)進(jìn)而對(duì)細(xì)胞活力、凋亡狀態(tài)和乳酸脫氫酶（LDH）釋放等功能進(jìn)行分析。線粒體膜電位（MMP）的測(cè)定采用JC1試劑盒。分別采用RT-PCR、ELISA和westernblot對(duì)IL-17a及分泌進(jìn)行檢測(cè)。在HS和NMN處理后的CEC共培養(yǎng)24h后，觀察RAW264.7細(xì)胞吞噬能力和極化的影響。此外，我們還分析了不同組RAW264.7中的Notch通路表達(dá)情況。使用SIRT1抑制劑Ex527和抗IL-17a單克隆抗體研究SIRT1和IL-17a在CEC調(diào)控巨噬細(xì)胞功能的作用。 結(jié)果：NMN干預(yù)提高了CEC中NAD+濃度，并提高細(xì)胞活力、降低細(xì)胞凋亡率及減少LDH的釋放。NMN可減輕HS誘導(dǎo)的MMP上調(diào)、細(xì)胞內(nèi)ROS蓄積和LDH的釋放。此外，在CEC-macrophage共培養(yǎng)體系中，結(jié)果表明NMN可促進(jìn)SIRT1表達(dá)，降低HS干預(yù)后的CEC中IL-17a的表達(dá)及分娩，從而減輕巨噬細(xì)胞的吞噬能力和M1極化。進(jìn)一步地，NMN處理CEC可通過Notch途徑抑制隨后的巨噬細(xì)胞活化?；贓X527和抗IL-17a抗體干預(yù)研究表明，SIRT1激活和IL-17a抑制是NMN功能的關(guān)鍵進(jìn)展。 結(jié)論：NMN可以通過抑制CEC中的IL-17a形成及分泌發(fā)揮調(diào)控巨噬細(xì)胞的功能，是HS應(yīng)激下的潛在角膜保護(hù)劑。CEC-巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)體系表明，巨噬細(xì)胞中Notch信號(hào)通路參與了NMN保護(hù)作用的發(fā)揮。 本次研究，由深圳希吉亞生物技術(shù)有限公司提供原料。