一、產(chǎn)品信息
二、擴(kuò)增流程
收到產(chǎn)品后,請先根據(jù)產(chǎn)品管壁標(biāo)簽來判斷產(chǎn)品形式,并在擴(kuò)增前準(zhǔn)確查找該質(zhì)粒的抗性、感受態(tài)和培養(yǎng)溫度。
1、質(zhì)粒干粉(請務(wù)必轉(zhuǎn)化挑單克隆重提后使用)
①收到質(zhì)粒干粉后請先5000rpm離心1min,再加入20μl 無菌水溶解質(zhì)粒;
②取2μl質(zhì)粒加至100μl 感受態(tài)中,冰浴30min后,42℃熱激90s,再冰浴2min;
③加入900μl無抗的LB液體培養(yǎng)基,180rpm震蕩培養(yǎng)45min;
④6000rpm離心5min,僅留100ul上清混勻菌體沉淀,并全涂至對應(yīng)抗性LB平板上;
⑤將平板正向培養(yǎng)1h,再倒置培養(yǎng)14-16h。如果是30度培養(yǎng)則培養(yǎng)20h;
(如果第二天菌落過多,請將質(zhì)粒稀釋后再轉(zhuǎn)化。如果第二天無菌落,請加入10μl質(zhì)粒轉(zhuǎn)化)
⑥挑取單菌落至LB液體培養(yǎng)基中,加入抗生素,37℃震蕩培養(yǎng)14~16h,根據(jù)實驗需要提取質(zhì)粒。
2、甘油菌:四區(qū)劃線后挑單菌落培養(yǎng),酵母菌需要先液體復(fù)蘇。
3、穿刺菌:穿刺接種后四區(qū)劃線,挑單菌落培養(yǎng)。
4、平板:直接挑單菌落液體培養(yǎng)。
5、液體質(zhì)粒:單獨提取的液體質(zhì)粒收到后可直接使用。
三、轉(zhuǎn)化圖片