在進(jìn)行核酸提取時(shí)，不只是依靠試劑盒中的裂解液和緩沖液，常常還需要使用到其他的組分來提高提取效率和核酸的質(zhì)量。本文將帶您深入了解兩種關(guān)鍵的輔助酶——核糖核酸酶A和蛋白酶K，探索它們?cè)诤怂峒兓胁豢苫蛉钡淖饔谩?/span>
切割的藝術(shù)—核糖核酸酶A
核糖核酸酶A不僅僅是一種酶，它是確保DNA純凈無瑕的關(guān)鍵——可以特異性地攻擊RNA上嘧啶殘基的3'端，切割與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵。這種酶的存在幫助科研人員在提取DNA時(shí)，清除可能混入的RNA雜質(zhì)。想象一下，在沒有這種精準(zhǔn)的“切割工”時(shí)，我們可能無法獲得用于PCR或測(cè)序等關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)的高質(zhì)量DNA。
RNase A應(yīng)用：
√ 去除DNA或蛋白質(zhì)樣品的RNA污染，如基因組DNA/質(zhì)粒提?。?/span>
√ 為DNA純化提供支持；
√ RNA檢測(cè)- RNA酶保護(hù)分析法中應(yīng)用；
RNase A 對(duì)RNA有水解作用，對(duì)DNA無影響，DNA提取實(shí)驗(yàn)中搭配RNase A有助于提高DNA純度; RNase A 作用于單鏈RNA時(shí)，效率高。推薦工作濃度為10-20μg/mL，兼容于多種反應(yīng)體系。
金普諾安自主研發(fā)生產(chǎn)的核糖核酸酶A（Ribonuclease A）是經(jīng)過蛋白質(zhì)工程技術(shù)改造的源于牛胰腺（bovine pancreas）的非特異性核糖核酸內(nèi)切酶，經(jīng)過酵母表達(dá)、純化獲得。它不含有原核生物表達(dá)的細(xì)菌內(nèi)毒素。
蛋白酶K：更多的不只是消化
蛋白酶K (Proteinase K)是一種廣譜型絲氨酸蛋白酶，能在各種條件下穩(wěn)定工作，特別是在含一定濃度SDS、尿素等變性環(huán)境中，依然保持較高酶活力。當(dāng)面對(duì)那些堅(jiān)硬的細(xì)胞壁或是蛋白質(zhì)豐富的樣本時(shí)，蛋白酶K展現(xiàn)了它的強(qiáng)大力量。它不只是簡(jiǎn)單地消化蛋白質(zhì)，蛋白酶K在不損害分離DNA完整性的前提下水解肽鍵來降解蛋白質(zhì)，釋放出被困的核酸，為純化過程掃清障礙。
生化領(lǐng)域的應(yīng)用：
√ 去除核酸酶和其它蛋白污染：應(yīng)用于基因診斷試劑盒、基因組DNA提取試劑盒、RNA提取試劑盒中。
√ 簡(jiǎn)化PCR樣本準(zhǔn)備：在直擴(kuò)PCR實(shí)驗(yàn)中用于生物樣本的初步處理，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)步驟。
√ 病毒核酸檢測(cè)：在處理病毒樣本時(shí)，蛋白酶K能夠裂解病毒外殼，暴露其核酸，便于后續(xù)的檢測(cè)。
√ 生物制藥工業(yè)：提取核酸、多糖類藥物等非蛋白類生物制品，例如DNA疫苗和肝素的制備。
在使用蛋白酶K時(shí)，需確保反應(yīng)緩沖液的pH和溫度適宜，以維持酶的活性。過高的溫度或不適宜的pH值可能導(dǎo)致酶活性下降。同時(shí)蛋白酶K的濃度過高會(huì)對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞，若濃度過低，則就會(huì)影響蛋白質(zhì)的水解程度導(dǎo)致提取效果受到影響。
金普諾安蛋白酶K來源于表達(dá)經(jīng)過定點(diǎn)突變優(yōu)化的林伯氏白色念球菌（Engyodontium album）蛋白酶K基因的畢赤酵母，具有比活性高、產(chǎn)量高及更廣的溫度/pH值活性范圍等優(yōu)勢(shì)。先進(jìn)的蛋白質(zhì)工程技術(shù)及28,000升酵母平臺(tái)有效單位成本，為生物醫(yī)藥研發(fā)與生產(chǎn)提供高性價(jià)比的蛋白酶K。酵母高效表達(dá)和色譜純化保證了產(chǎn)品的純度，本產(chǎn)品不含細(xì)菌內(nèi)毒素，應(yīng)用范圍比天然蛋白酶K更廣泛。
結(jié)語(yǔ)：蛋白酶K和RNase A是核酸提取中不可或缺的輔助工具。它們各自具有獨(dú)特的作用和應(yīng)用范圍，正確的使用可以大大提高實(shí)驗(yàn)的效率和核酸的質(zhì)量。在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和操作時(shí)，應(yīng)注意各種條件和參數(shù)，以充分發(fā)揮這些輔助酶的作用。
——文章插圖來源于攝圖網(wǎng)，已獲授權(quán)