支原體檢測(cè)

支原體是實(shí)驗(yàn)室中常見(jiàn)的污染細(xì)胞的原核生物（Table 1）。其環(huán)狀雙鏈DNA中富含腺嘌呤和胸腺嘧啶，細(xì)胞質(zhì)中含有16S和23S核糖體RNA。因支原體屬于直徑介于0.2-2µm的最小原核生物，形態(tài)易變，故極易通過(guò)濾膜而逃過(guò)培養(yǎng)液的過(guò)濾除菌步驟。又因其缺少細(xì)胞壁，所以對(duì)某些常用抗生素具有抗性。在細(xì)胞培養(yǎng)液中，支原體可達(dá)到107-108CFU/mL（CFU=Colony Forming Unit，是一種支原體的濃度測(cè)量單位）而不使培養(yǎng)液混濁及影響細(xì)胞生長(zhǎng)。多種支原體對(duì)細(xì)胞不產(chǎn)生任何病變效應(yīng)，使得細(xì)胞污染不易被察覺(jué)。

支原體會(huì)改變宿主細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能等一系列特征，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)。因此每一株外來(lái)細(xì)胞在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室之前都應(yīng)通過(guò)支原體檢測(cè)，并且每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)對(duì)其培養(yǎng)中的細(xì)胞進(jìn)行定期支原體檢測(cè)。

可污染細(xì)胞的支原體種類(lèi)較多，主要有Mycoplasma orale, M.hyorhinis, M.arginini和Acholeplasma laidlawii。目前已發(fā)現(xiàn)的支原體超過(guò)100種，這就是單一的檢測(cè)方法有時(shí)會(huì)失敗的原因之一。我們建議至少選擇2種方法來(lái)檢測(cè)支原體。   

DNA-Fingerprinting檢測(cè)

用四對(duì)引物DXS52、 Apo-B、 MD17S5和D2S44監(jiān)測(cè)人類(lèi)來(lái)源的細(xì)胞株在傳代過(guò)程中變異情況。

同工酶檢測(cè)

對(duì)INNOVATIVE Chemistry的The Authentikit System進(jìn)行國(guó)產(chǎn)化，主要使用LDH, G6PD, MDH和PEP-B四種酶，檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的種間污染。

細(xì)胞活力檢測(cè)

用Nexcelom公司的Cellometer mini型細(xì)胞計(jì)數(shù)及分析系統(tǒng)，通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)凍存細(xì)胞及培養(yǎng)細(xì)胞的濃度及活力。

內(nèi)毒素檢測(cè)

細(xì)菌內(nèi)毒素對(duì)培養(yǎng)物的危害：實(shí)驗(yàn)證明，細(xì)菌內(nèi)毒素對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞（尤其是ES細(xì)胞）的生長(zhǎng)及活性具有明顯的抑制作用,且該作用具有一定的時(shí)間、劑量依賴(lài)性。 　　

細(xì)胞培養(yǎng)中內(nèi)毒素的來(lái)源：細(xì)胞培養(yǎng)基中的主要天然成份---牛血清包括胎牛血清和新生牛血清是內(nèi)毒素的潛在來(lái)源。我國(guó)2000年版《中國(guó)生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》中對(duì)牛血清提出比較嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)要求。包括蛋白質(zhì)含量，細(xì)菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細(xì)菌內(nèi)毒素，支持細(xì)胞增殖檢查等等。對(duì)于胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)，LIF和bFGF是細(xì)菌內(nèi)毒素的另一個(gè)潛在來(lái)源。 　　

細(xì)胞培養(yǎng)中內(nèi)毒素的監(jiān)控：為排除血清、LIF和bFGF中內(nèi)毒素的污染，細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)是非常重要的。本平臺(tái)只使用細(xì)菌內(nèi)毒素小于1EU/ml的血清、LIF和bFGF。本平臺(tái)對(duì)購(gòu)進(jìn)的每一批血清、LIF和bFGF都要進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)，并向所內(nèi)外科研單位提供經(jīng)檢測(cè)的LIF和bFGF。同時(shí)我們也為所內(nèi)外科研單位提供內(nèi)毒素檢測(cè)服務(wù)。