設(shè)計(jì)ELISA復(fù)孔檢查時(shí)，是對同一個(gè)樣品作兩次稀釋，再別離加到板上的兩個(gè)孔，仍是只稀釋一次，然后吸取兩次別離加到兩個(gè)孔？前者似乎把稀釋時(shí)的差錯(cuò)也考慮到了，但做出來的成果兩個(gè)孔相關(guān)挺大的。而較常運(yùn)用的是哪種稀釋方法？
為了減小差錯(cuò)，是先稀釋再加樣。而針對這位客戶所遇到的疑問，我公司技術(shù)人員是這樣解說的：
1. 前者測的是稀釋和移液的差錯(cuò)，后者只有移液差錯(cuò)。
2. 一般都是稀釋一次，分兩孔吧。同濃度的分復(fù)孔。
3. 由所以從同一原液稀釋，一般不考慮稀釋差錯(cuò)(稀釋差錯(cuò)是存在的)，都是稀釋到想要的倍數(shù)直接分孔(而不是逐個(gè)稀釋，這樣可以使稀釋差錯(cuò)減小)。
4. 復(fù)孔是為了排除移液體積，板的影響，以及其他系統(tǒng)差錯(cuò)的，要求復(fù)孔的濃度是共同的。稀釋后分孔能滿意此要求，逐個(gè)稀釋不能。
ELISA操作技巧
1.操作前應(yīng)對試驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解，如環(huán)境溫度（保持在18 C～25℃）、反響孵育溫度和孵育時(shí)刻、洗刷的次數(shù)等，要先檢查水育箱溫度，ELISA試劑盒是否符合要求。
2.正確運(yùn)用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺，血清殘留在反響孔壁上，加樣器吸頭要清洗潔凈，避免污染，加樣次序要與說明書共同，否則可導(dǎo)致成果錯(cuò)誤，試驗(yàn)重復(fù)性差。
3.手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大，洗刷次數(shù)不要超越說明書引薦的洗刷次數(shù)，洗液在反響孑L內(nèi)停留的時(shí)刻不宜太長。不要使洗液在孑L間竄流，形成孔問污染，導(dǎo)致假陰性或假陽性。
4.要確保加液量共同 咱們在運(yùn)用時(shí)感覺滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量禁絕，形成顯色不統(tǒng)一，判別錯(cuò)誤。
5.顯色液量不可過多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下，加顯色系統(tǒng)后要避光反響，顯色液量不能過多，以免顯色過強(qiáng)。