宿主細(xì)胞DNA(Host Cell DNA)是指用于生產(chǎn)生物制品(如重組蛋白、疫苗、生物藥物等)細(xì)胞中的遺傳物質(zhì)。在生物技術(shù)和生物制藥行業(yè)中,這類生物制品通常是通過在特定宿主細(xì)胞中表達(dá)目標(biāo)基因來生產(chǎn)的。這些宿主細(xì)胞的類型多樣,包括細(xì)菌(例如大腸桿菌)、酵母、昆蟲細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞等。 然而在實(shí)際生產(chǎn)和純化過程中,宿主細(xì)胞DNA往往會(huì)不可避免地遷移到最終產(chǎn)品中,由于其可能導(dǎo)致安全性問題(如潛在的基因毒性或免疫反應(yīng)),因此,監(jiān)管機(jī)構(gòu)通常會(huì)制定嚴(yán)格的宿主細(xì)胞DNA殘留限制標(biāo)準(zhǔn),以確保生物制品的安全性和有效性。
宿主DNA殘留標(biāo)準(zhǔn)
我國藥典及美國FDA均對宿主殘留DNA量進(jìn)行明文規(guī)范:例如2020版《中國藥典》明確規(guī)定用Vero細(xì)胞生產(chǎn)人用狂犬病疫苗,Vero細(xì)胞DNA殘留應(yīng)不高于3ng/劑;基于Vero細(xì)胞的脊髓灰質(zhì)炎疫苗,DNA殘留量不高于50pg/劑;基于CHO細(xì)胞的乙肝疫苗,DNA殘留量不高于10pg/劑。

表 宿主細(xì)胞殘留DNA的限定標(biāo)準(zhǔn)
隨著技術(shù)的發(fā)展,人們認(rèn)識(shí)到,除了要減少殘留DNA的量,也應(yīng)該降低宿主DNA片段的大小至功能基因大?。ù蠹s200bp)以下,從而減少致瘤性和感染性風(fēng)險(xiǎn)。 基于此,CDE 2022年5月發(fā)布的《體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價(jià)技術(shù) 指導(dǎo)原則(試行)》中明確指出,生產(chǎn)若使用了腫瘤細(xì)胞系(如Hela細(xì)胞)、致瘤細(xì)胞系,或攜帶有致瘤基因、病毒來源序列的細(xì)胞(如HEK 293T細(xì)胞),在確保無完整活細(xì)胞殘留的同時(shí),需對DNA的殘留量和殘留片段大小進(jìn)行控制,合理擬定標(biāo)準(zhǔn)限度。如有可能,建議盡量將殘留DNA控制在10ng/劑以內(nèi), DNA殘留片段的大小控制在200bp以下。

表 宿主細(xì)胞殘留DNA片段風(fēng)險(xiǎn)等級
去除宿主DNA常見方法
宿主DNA的去除可以通過多種方法實(shí)現(xiàn),每種方法都有其特定的優(yōu)缺點(diǎn),目前常見的方法主要為層析法、酶法、沉淀法等。傳統(tǒng)單一的方法均存在核酸殘留去除不凈、工作量大、耗時(shí)長等缺陷,廣譜核酸酶則可完美解決此類難點(diǎn)。
廣譜核酸酶,又稱為全能核酸酶,一種來源于粘質(zhì)沙氏菌(Serratia marcescens,又稱靈桿菌)的非特異性核酸內(nèi)切酶,它不含有原核生物表達(dá)的細(xì)菌內(nèi)毒素。無論是實(shí)驗(yàn)研究還是工業(yè)生產(chǎn),廣譜核酸酶都是目前少有能夠同時(shí)高效降解任何形式DNA和RNA的酶。
廣譜核酸酶的使用與優(yōu)勢
廣譜核酸酶能夠降解所有形式的DNA和RNA,包括單鏈、雙鏈、線性、超螺旋和環(huán)狀DNA、RNA及基因組DNA,對核酸序列沒有特異性。在純化工藝中使用廣譜核酸酶,可有效降低細(xì)胞裂解液粘度,改善蛋白純化工藝,高效去除重組蛋白制品核酸污染,大幅降低終產(chǎn)品污染風(fēng)險(xiǎn),滿足法規(guī)要求,在細(xì)胞治療、病毒載體疫苗等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。

核酸酶的作用位點(diǎn)
廣譜核酸酶在廣泛的條件下仍有很強(qiáng)的生物酶活性,跟大多數(shù)生物酶一樣,核酸酶的活性也會(huì)隨溫度、pH值、Mg2+、緩沖體系和底物濃度等因素的改變而變化。對于廣譜核酸酶使用方法,可以點(diǎn)擊小編之前發(fā)布的文章《干貨分享| 廣譜核酸酶的使用,你學(xué)會(huì)了嗎?》進(jìn)行了解。
相關(guān)產(chǎn)品
高度穩(wěn)定性
比活性大于1000 KU/mg蛋白
無動(dòng)物源性成分
避免原核細(xì)胞的內(nèi)毒素污染
不含蛋白酶殘留
供應(yīng)穩(wěn)定,到貨快