HDAOS是生化試劑盒中常用的顯色試劑,同樣TMB也是應(yīng)用普遍的顯色試劑,那么這兩種試劑作為顯色試劑哪個更好呢?其實兩種不存在哪個好,主要是應(yīng)用上有一些區(qū)別,選擇合適的顯色試劑即可。
HDAOS的物化性質(zhì)
HDAOS是新型Trinder’s試劑中的一種,CAS號:82692-88-4,全稱N-(2-羥基-3-磺丙基)-3'5-二甲氧基苯胺鈉鹽。HDAOS在過氧化物酶存在的情況下,可以與4-AAP耦聯(lián)被過氧化氫氧化,該反應(yīng)非常靈敏。所以HDAOS通常被用于有過氧化物酶參與或H2O2參與的生化檢測中,比如血清總膽固醇的檢測、血脂檢測等。
TMB試劑的物化性質(zhì)
它是一種用于ELISA試劑盒中的一種色原底物,應(yīng)用很普遍。TMB,即3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine,是辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)的最常用底物之一。在辣根過氧化物酶或其它適當(dāng)過氧化物酶的催化下,TMB會產(chǎn)生可溶性藍(lán)色產(chǎn)物,該藍(lán)色產(chǎn)物通??梢栽?/span>370nm或620-650nm測定吸光度。由于辣根過氧化物酶與TMB的反應(yīng)在一定時間內(nèi)能持續(xù)進(jìn)行,若不及時終止反應(yīng),可能會由于反應(yīng)達(dá)到平臺期等而影響實驗結(jié)果。
HDAOS試劑的優(yōu)勢
生化檢測中應(yīng)用的色原底物很多,HDAOS是一種酶分析法,靈敏度很高,需要的設(shè)備簡單。比如普遍采用色原底物HDAOS的酶法測定總膽固醇,其優(yōu)點是快速準(zhǔn)確、專一性強(qiáng)、樣本用量少、不需抽提,便于自動化分析和批量測定(氣相和高效液相色譜法條件要求高)。
HDAOS與過氧化氫反應(yīng)時需要與4-AAP耦聯(lián),而TMB是不用的,不過HDAOS的顯色產(chǎn)物吸收波長要遠(yuǎn)大于TMB的產(chǎn)物吸收波長,這樣干擾會更少一些。目前我們生產(chǎn)的色原底物除了HDAOS之外,總共有是多種,比如ADPS、TOPS、DA64等等。