細(xì)胞侵襲與細(xì)胞遷移比較類似，但是“侵襲”需要細(xì)胞穿過胞外基質(zhì)層（ECM）或基底膜基質(zhì)層（BME），在這個過程中細(xì)胞先酶解去除ECM/BME的阻礙，從而在趨化因子濃度梯度的驅(qū)使下完成從一處到另一處的移動。常用來評估腫瘤細(xì)胞在正常組織中轉(zhuǎn)移的能力，但正常細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞也有相同的能力。細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)主要應(yīng)用于各種細(xì)胞因子對惡性腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響及一些抑制血管生成的新藥研究。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)是檢測腫瘤細(xì)胞侵襲能力最常用的實(shí)驗(yàn)方法，其原理是用一層聚碳酸酯膜將高營養(yǎng)的培養(yǎng)液和低營養(yǎng)的培養(yǎng)液隔開，細(xì)胞接種到低營養(yǎng)的培養(yǎng)液里，通常膜孔都被Matrigel覆蓋，模仿細(xì)胞外基質(zhì)，腫瘤細(xì)胞必須分泌水解酶并通過變形運(yùn)動才能穿過鋪有Matrigel的濾膜，計數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反應(yīng)腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。

1、ECM Gel原液提前1h放在4℃冰箱中解凍，實(shí)驗(yàn)前轉(zhuǎn)移到冰盒中。

2、將1.5 mL EP管、槍頭和細(xì)胞小室（已先行放入孔板中），置于冰上預(yù)冷。

3、根據(jù)自己的使用量，按照ECM Gel:無血清培養(yǎng)基=1:7.5在冰上稀釋成使用液。

4、把槍頭剪去一小段（約3μm）后在冰上吸取40μL/孔ECM Gel使用液輕輕加入小室的上室中，加入時慢慢移動槍頭，保證液體平鋪在底部。

5、放在37℃孵箱15min，讓膠凝固。

6、消化、離心、計數(shù)細(xì)胞后，按照2.5x104/mL用無血清培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液（如果細(xì)胞很多，這一步可以提前，在4、5之前做）。

7、按照每孔200μL，將細(xì)胞懸液加入上室，同時在下室加入10%FBS+培養(yǎng)基500μL，放入37℃孵箱培養(yǎng)。

8、若干小時后取出，吸去上室多余液體，用PBS清洗兩次，用棉棒在上室中輕輕轉(zhuǎn)動，吸干水分并擦去膜內(nèi)側(cè)的細(xì)胞。

9、在上室中加入結(jié)晶紫染液，染色5 min，回收染液，用流水緩緩沖去染液，再次用棉棒在上室中輕輕轉(zhuǎn)動，吸干水分。

10、在正置顯微鏡上放置一塊載玻片，將細(xì)胞小室倒置放在上面，拍照。

11、在100倍視野下，對膜的上下左右及中間計數(shù)，做平均數(shù)。