背景[1-6]
Clean-Blot IP Detection Kit(HRP)含有足夠的Clean-Blot IP檢測(cè)試劑和附件試劑，可用于25個(gè)微量印跡或2000 cm2的膜。Clean-Blot IP Detection Reagent是一種辣根過氧化物酶偶聯(lián)物，針對(duì)免疫沉淀后的一級(jí)抗體Western印跡檢測(cè)進(jìn)行了優(yōu)化，不受變性IP抗體片段的干擾。Clean-Blot IP Reagent可在IP檢測(cè)（免疫沉淀）后對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行無故障的Western印跡檢測(cè)。
它通過特異性結(jié)合功能性一抗（完整IgG）而不與IP抗體的片段結(jié)合起作用，所述IP抗體片段通常通過電泳和膜轉(zhuǎn)移伴隨免疫沉淀的蛋白質(zhì)。Clean-Blot IP試劑和試劑盒消除了用于初始免疫沉淀試驗(yàn)的抗體的重鏈（約50kDa）和輕鏈（25kDa）IgG片段的檢測(cè)干擾。
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。當(dāng)用預(yù)先固化在argarose beads上的蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來。
再通過蛋白變性分離，對(duì)B蛋白進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)而證明兩者間的相互作用。這種方法得到的目的蛋白是在細(xì)胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的，符合體內(nèi)實(shí)際情況，得到的結(jié)果可信度高。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
Clean-Blot IP檢測(cè)試劑的特點(diǎn)：
1.通用-結(jié)合并檢測(cè)大多數(shù)物種，IgG亞類和一級(jí)抗體的同種型，通常用于蛋白質(zhì)印跡
2.兼容-使用蛋白A，蛋白G或抗IgG瓊脂糖珠和任何阻斷緩沖液進(jìn)行IP分析有效
3.具有成本效益-消除與共價(jià)固定IP抗體相關(guān)的成本和額外工作，作為克服蛋白質(zhì)印跡干擾的手段
4.靈活的-辣根過氧化物酶（HRP）試劑，用于化學(xué)發(fā)光，熒光或比色底物的檢測(cè)
5.易于使用-無需更改Western印跡方案;簡(jiǎn)單地用Clean-Blot IP檢測(cè)試劑取代傳統(tǒng)的二級(jí)HRP共軛物
6.無阻礙檢測(cè)-clear蛋白質(zhì)印跡結(jié)果用于免疫沉淀試驗(yàn)，沒有來自變性IgG條帶的顯著干擾
應(yīng)用[7-9]
可用于免疫沉淀篩選與雙剪接型2.2Kb HBV剪接變異體特異性蛋白HBDSP相互作用的肝細(xì)胞蛋白：
乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）是一種部分雙鏈環(huán)狀嗜肝DNA病毒，在醫(yī)學(xué)和公共衛(wèi)生上具有重要的意義。從世界范圍來看，大約有350000000的人感染乙肝病毒，其中亞洲地區(qū)占了75%。HBV是慢性肝炎、肝硬化和肝癌的主要致病原因，每年導(dǎo)致1000000人死亡。HBV基因組剪接變異體(spliced variants of hepatitis B virus genomes)是由3.5Kb前基因組RNA(pregenomic RNA,pgRNA)經(jīng)剪接后逆轉(zhuǎn)錄而成的一類亞基因組DNA。其中長(zhǎng)度為2.2kb的HBV剪接變異體占了80%以上，其剪接類型分為單剪接型和雙剪接型，對(duì)2.2Kb HBV剪接變異體的功能研究顯示，此類變異體可能導(dǎo)致肝細(xì)胞凋亡并與HBV的持續(xù)性感染密切相關(guān)，但其確切致病機(jī)制迄今未明。
本研究旨在利用免疫沉淀技術(shù)探索能夠與雙剪接型2.2Kb剪接變異體編碼的剪接特異性新蛋白（Hepatitis B Doubly Spliced Protein,HBDSP）相互作用的肝細(xì)胞蛋白，以此深入了解其致病性。進(jìn)一步通過GST pull-down實(shí)驗(yàn)證實(shí)HBDSP與TFII-I蛋白在體外具有相互作用。TFII-I蛋白是一個(gè)多功能轉(zhuǎn)錄因子，不僅能夠促進(jìn)染色質(zhì)重塑，同時(shí)在細(xì)胞有絲分裂周期中具有重要作用。HBDSP與TFII-I的相互作用，可能影響肝癌細(xì)胞的分裂和增殖。本研究為深入探討HBDSP的致病性奠定基礎(chǔ)。
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