背景^[1-3]

beta Actin Monoclonal Antibody(15G5A11/E2)是beta Actin Monoclonal作為抗原對實驗動物進(jìn)行免疫后篩選出只產(chǎn)生的beta Actin Monoclonal抗體的B淋巴細(xì)胞，再將B細(xì)胞通過細(xì)胞融合技術(shù)與骨髓瘤雜交然后篩選出只分泌beta Actin Monoclonal抗體的雜交瘤細(xì)胞，最后通過層析柱純化制的高純度的beta Actin Monoclonal抗體。β肌動蛋白是已鑒定的六種肌動蛋白異構(gòu)體之一。

生理作用^[4-7]

β肌動蛋白是所有人類細(xì)胞類型中的非肌肉細(xì)胞骨架蛋白，參與細(xì)胞運動，結(jié)構(gòu)和完整性。人體中存在六種不同的肌動蛋白同種型。肌動蛋白的β同種型以及γ肌動蛋白在大多數(shù)細(xì)胞類型中共存，作為細(xì)胞骨架的組分。β肌動蛋白是在所有真核細(xì)胞中無處不在地表達(dá)的細(xì)胞質(zhì)蛋白。球狀肌動蛋白（G-肌動蛋白）的聚合導(dǎo)致兩條螺旋形式的結(jié)構(gòu)絲（F-肌動蛋白）。肌動蛋白是高度保守的蛋白質(zhì)，參與細(xì)胞運動，結(jié)構(gòu)和完整性。因為β肌動蛋白在所有真核細(xì)胞中普遍表達(dá)，所以它經(jīng)常用作涉及蛋白質(zhì)檢測的測定的上樣對照，例如Western印跡。

β-肌動蛋白抗體為研究β-肌動蛋白的細(xì)胞內(nèi)分布以及細(xì)胞骨架的靜態(tài)和動態(tài)方面提供了一種特殊而有用的工具。通過將各種細(xì)胞裂解物加載到4-20％Tris-HCl聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行β-肌動蛋白的蛋白質(zhì)印跡分析。將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至低熒光PVDF膜并用Sea Block封閉緩沖液封閉至少1小時。用β-肌動蛋白單克隆抗體以1：500的稀釋度在搖動平臺上于4℃探測過夜，并在TBS-0.1％Tween-20中洗滌,使用熒光成像系統(tǒng)進(jìn)行檢測。 [192] β-肌動蛋白是肌動蛋白家族的一員，廣泛表達(dá)于真核生物非肌細(xì)胞中，是構(gòu)成細(xì)胞骨架和肌小節(jié)的主要成分。它具有重要的生理功能，幾乎參與了真核細(xì)胞的所有生理過程，如細(xì)胞結(jié)構(gòu)的維持、細(xì)胞內(nèi)運動、細(xì)胞分裂等。作為一種細(xì)胞質(zhì)肌動蛋白，β-肌動蛋白在所有組織中相對持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)，因此β-肌動蛋白基因常用作定量或半定量研究的對照基因。由管家基因的身份所決定，β-肌動蛋白基因的啟動子為強(qiáng)啟動子，對于提高轉(zhuǎn)基因表達(dá)量具有顯著效果，且其表達(dá)不受組織的限制，這兩大優(yōu)點使得β-肌動蛋白基因啟動子在轉(zhuǎn)基因動物的研究中發(fā)揮著重要的作用。

應(yīng)用^[8][9]

用于細(xì)胞核肌動蛋白參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的分子機(jī)制研究。

肌動蛋白是一類高度保守的蛋白質(zhì),存在于所有的真核細(xì)胞中,參與細(xì)胞分裂、運動、遷移、形態(tài)的維持、生長等許多重要生理活動。有研究指出,肌動蛋白也存在于細(xì)胞核內(nèi)。但由于肌動蛋白是豐富的胞質(zhì)蛋白,致使這一結(jié)論受到質(zhì)疑。后來,依賴生物化學(xué)、免疫熒光、免疫電子顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡等實驗技術(shù),證明肌動蛋白普遍存在于各類細(xì)胞的細(xì)胞核中。

雖然肌動蛋白在細(xì)胞質(zhì)中的功能已經(jīng)被研究的很透徹,但它在細(xì)胞核內(nèi)的功能還不清楚。有實驗指出,肌動蛋白在核運輸方面發(fā)揮作用,可能參與RNA運輸及mRNA加工。肌動蛋白還能與protein 4.1共定位,可能參與核組裝過程。此外,肌動蛋白還能與染色質(zhì)改構(gòu)復(fù)合物和乙酰轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物相互作用,在染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的調(diào)整方面也發(fā)揮重要作用。越來越多的證據(jù)表明肌動蛋白也能參與基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控。在早期的實驗中,微注射肌動蛋白的抗體或結(jié)合蛋白能抑制燈刷染色體的轉(zhuǎn)錄。肌動蛋白還能與RNA聚合酶II共純化,對RNA聚合酶II體外的有效轉(zhuǎn)錄起到作用。

最近有實驗指出,肌動蛋白能被募集到基因的啟動子區(qū),是轉(zhuǎn)錄前起始復(fù)合物的成分。但肌動蛋白在此復(fù)合物中的作用還有待于進(jìn)一步研究。本文通過實驗證明,RNA解旋酶A是轉(zhuǎn)錄前起始復(fù)合物中能夠與肌動蛋白相互作用的蛋白質(zhì)。我們首先通過免疫共沉淀和免疫熒光標(biāo)記技術(shù)證明RNA解旋酶A在體內(nèi)可以與肌動蛋白相互作用。然后利用GST pull-down實驗證實RNA解旋酶A主要是通過其RGG區(qū)域與肌動蛋白作用,并且這一負(fù)顯性突變體能夠抑制RNA聚合酶II募集到轉(zhuǎn)錄前起始復(fù)合物中。此外,過表達(dá)或干涉RNA解旋酶A都能夠影響RNA聚合酶II與肌動蛋白之間的相互作用,并且也能影響肌動蛋白所參與的基因表達(dá)。綜上所述,RNA解旋酶A對肌動蛋白參與的轉(zhuǎn)錄過程起到重要調(diào)節(jié)作用。

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