背景^[1-7]

非凍型組織DNA保存液能在室溫條件下長期保存動物和植物DNA組織樣品的保存液。它能迅速滲入細胞，通過高效抑制DNase的活性而長期保證DNA分子的完整性。迅速將新鮮組織剪碎（0.5立方厘米以下）按每克組織/10 mL本產(chǎn)品的比例浸沒在適量本產(chǎn)品中，置于適當(dāng)溫度即可。

導(dǎo)致組織核酸降解的常見非酶因素：液中殘留重金屬離子磷酸二酯鍵的斷裂、長期存放/光照產(chǎn)生的自由基磷酸二酯鍵的斷裂、UV形成嘧啶二聚體、DEPC使RNA中沒配對的腺嘌呤羧甲基化，但對雙鏈核酸危害小、高溫和低pH脫嘌呤反應(yīng)（depurination）、EB導(dǎo)致可見光對DNA的光氧化（photooxidation）、酚其氧化產(chǎn)物使磷酸二酯鍵斷裂甲酰胺溶液酸化后（pH 5）引起RNA降解、醚殘留過氧化物使磷酸二酯鍵的斷裂、醇殘留重金屬離子使磷酸二酯鍵的斷裂。

實驗操作：

1.估計完全浸沒樣品所需要Tissue DNAlocker的體積。

注：1g組織約需10 mL Tissue DNAlocker。

2.標(biāo)記收集管并加入估計所需量的Tissue DNAlocker。

3.以最快速度將樣品剪切成厚度小于0.5 cm的碎塊。

注:鼠肝、腎和脾等小器官樣品和沒有蠟質(zhì)保護層的植物樣品可不需剪切而直接放入本產(chǎn)品中保存，有蠟質(zhì)保護層的植物樣品需要先將蠟表皮破壞。

4.將組織碎塊完全浸沒于收集管的Tissue DNAlocker中。

5.將收集管存放于溫度適當(dāng)?shù)牡胤剑４鏈囟炔灰陀?℃。

6.從存放處取出樣品，用消過毒的鑷子將組織碎塊從保護液中取出。立即開始DNA提取。

特點：

1.保存時間長，可室溫保存動植物組織長達兩年，保護DNA不被降解。

2.安全可靠，本產(chǎn)品無毒無害，從DNAlocker保存的樣品中提得的DNA可用于酶切和PCR等分子生物學(xué)實驗。

3.使用簡單，直接把新鮮的動植物樣品浸在DNAlocker中即可。

4.可廣泛用于各種動植物標(biāo)本的野外采集。

應(yīng)用^[8][9]

非凍型組織DNA保存液可用于組織樣本的常溫保存：

隨著分子生物學(xué)技術(shù)在水產(chǎn)動物疾病診斷中應(yīng)用的逐漸深入，動物組織中核酸的有效保存成為后續(xù)分子學(xué)研究的關(guān)鍵。一種安全、方便的水產(chǎn)動物樣品保存液，將為水產(chǎn)動物樣品采集及后續(xù)的分子研究提供方便。

以凡納濱對蝦為研究對象，以銨鹽、乙醇為基礎(chǔ)成份，通過不同的組合篩選一種常溫下對凡納濱對蝦核酸有較好保存效果的保存液配方。將乙酸銨、甲酸銨、硫酸銨分別在0%、30%乙醇、50%乙醇和70%乙醇中溶解到飽和狀態(tài)，添加EDTA和檸檬酸鈉后調(diào)節(jié)pH(5.2、6.0、7.0)得到36種保存液。對凡納濱對蝦RNA溶液的保存實驗結(jié)果顯示，28℃下，70%乙醇為溶劑的飽和乙酸銨溶液和50%、70%乙醇為溶劑的飽和硫酸銨溶液保存3d回收的RNA28S和18S條帶完整、界限清晰。

在以上結(jié)果的基礎(chǔ)上以不同濃度乙醇為溶劑，配制不同pH的硫酸銨和乙酸銨飽和溶液，測試其對凡納濱對蝦組織的滲透效應(yīng)和對RNA在常溫條件下的保護作用。結(jié)果表明，乙酸銨比硫酸銨在乙醇中的溶解度高的多，而且其銨離子的摩爾濃度在0—80%乙醇溶劑中比較穩(wěn)定。乙酸銨比硫酸銨能更快滲透到整體的對蝦組織中，并達到更高的濃度。

硫酸銨在70%乙醇中的飽和溶液和乙酸銨在50%乙醇中的飽和溶液（pH6.0）保存的RNA條帶完整清晰，保存效果較好.推薦50%乙醇溶液中的飽和乙酸銨溶液（pH6.0）作為樣品采集及常溫保存的保存液。該結(jié)果為野外樣品采集及常溫運輸提供一種有效方法。為探索一種可應(yīng)用于現(xiàn)場快速采集核酸的簡易工具，本論文以纖維素材料的木、竹牙簽為基質(zhì)，并分別經(jīng)過氨基化處理和季氨基化處理，以FTA膜片為對照，吸取核酸溶液后分別用去離子水、TE buffer(pH8.0)、1PCR buffer進行洗脫回收。

參考文獻

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