背景[1-6]
非凍型拭子DNA保存液是一種常用的的生物樣品取材方法，可以用于PCR等分子生物學(xué)分析。拭子取材的主要特點是快捷和非介入性（不會對對象造成傷害），尤其適用于大規(guī)模篩查取樣和特殊群體（如兒童）和組織（如口腔）的取樣。將拭子涂抹面頰的口腔內(nèi)表面約十次,放入加有0.5 mL拭子保存液的1.5mL塑料離心管中,剪去專用拭子柄部,留藥棉頭于離心管中,蓋上離心管后即可長期保存。
拭子是一種常用的的生物樣品取材方法，可以用于PCR等分子生物學(xué)分析。拭子取材的主要特點是快捷和非介入性(不會對對象造成傷害)，尤其適用于大規(guī)模篩查取樣和特殊群體（如兒童）和組織（如口腔）的取樣。但是，對于野外采集的拭子樣品和跨區(qū)域采集的拭子樣品，如何保存并運輸?shù)浇y(tǒng)一處理中心一直是一個非常棘手的問題。
非凍型拭子DNA保存液具有下列特點：
1.常溫保存時間長達半年，方便了拭子樣品的野外采集和長途運輸。
2.適用于各種拭子樣品，包括口腔拭子、鼻腔拭子、陰道拭子等。
3.跟各種纖維棉拭子兼容。但使用本公司專用拭子效果更佳（因為所有優(yōu)化都是在此專用拭子的基礎(chǔ)上完成的，80802B包裝含200只專用拭子）。
4.保存的拭子可以用柱式拭子DNAOUT（CAT#：80801）提取其DNA。
5.一個樣品可以用一個微型離心管保存，程度地避免了樣品間的交叉污染。
6.試劑本身安全環(huán)保，無毒。
應(yīng)用[7][8]
非凍型拭子DNA保存液可用于DNA樣本快速采集及保存：
通過采集鼻咽拭子的方法,檢測鼻咽癌高危人群中鼻咽部EBV-DNA載量,并評價這一指標(biāo)是否能提高隨訪方法的特異度,減少需要反復(fù)隨訪人群的數(shù)量。材料與方法：廣西蒼梧縣作為國家癌癥早診早治示范基地項目點,在2006年1月至2013年6月實施了鼻咽癌早診早治篩查項目,從蒼梧縣隨機抽取3個鎮(zhèn)(石橋、沙頭、梨埠鎮(zhèn)),30-59歲當(dāng)?shù)鼐用窦{入篩查對象,篩查對象經(jīng)過免疫酶法檢測血清EB病毒抗體、臨床檢查(頭、頸部、鼻咽部檢查)初次篩查后,將EB病毒抗體陽性者定為鼻咽癌高危人群并納入高危人群隊列進行隨訪。
在進行高危人群隨訪復(fù)查時,除采血進行免疫酶法檢測血清VCA/IgA抗體滴度及臨床檢查外,同時收集到部分鼻咽癌高危人群鼻咽拭子樣本。本研究通過提取鼻咽拭子樣本中的DNA,采用實時熒光定量PCR方法(q-PCR)檢測EB病毒DNA載量水平,分析鼻咽癌高危人群中血清VCA/IgA抗體滴度及鼻咽部EB病毒DNA載量分布情況,然后分析鼻咽拭子中EB病毒DNA載量與血清VCA/IgA抗體水平的關(guān)系,對鼻咽癌病例與高危人群的VCA/IgA與EBV-DNA載量水平進行比較。
最后,比較不同截斷值(cut-off value)下VCA/IgA與EBV-DNA載量的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值,制作受試工作者特征曲線(ROC曲線),通過計算曲線下面積(Area under the curve,AUC)評估和對比兩個檢測指標(biāo)的診斷效能。在鼻咽癌的高發(fā)地區(qū),幾乎100%的低分化型鼻咽癌患者攜帶有EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)。
目前,EBV相關(guān)抗體血清學(xué)檢測己廣泛應(yīng)用于鼻咽癌的大規(guī)模人群篩查。對血清學(xué)篩查出抗體陽性的高危人群需要進行定期隨訪,隨訪的方法仍是以檢測血清中EBV抗體及鼻咽鏡檢查為主,但此時檢查方法的特異度已大幅降低,這些高危人群經(jīng)過反復(fù)的檢查,血清抗體一直處于陽性狀態(tài)卻無腫瘤的發(fā)生,即絕大多數(shù)的血清EBV抗體陽性的人群在隨訪過程中經(jīng)受了不必要的抗體檢測及鼻咽鏡檢查。因此尋找新的生物學(xué)標(biāo)志物及方法來提高篩查診斷效率對鼻咽癌的篩查有較大的臨床意義。
參考文獻
[1]Evaluation of plasma Epstein‐Barr virus DNA load to distinguish nasopharyngeal carcinoma patients from healthy high‐risk populations in Southern China[J].Ming‐Fang Ji,Qi‐Hong Huang,Xia Yu,Zhiwei Liu,Xinghua Li,Li‐Fang Zhang,Panpan Wang,Shang‐Hang Xie,Hui‐Lan Rao,Fang Fang,Xiang Guo,Qing Liu,Ming‐Huang Hong,Weimin Ye,Yi‐Xin Zeng,Su‐Mei Cao.Cancer.2014(9)
[2]Early detection of nasopharyngeal carcinoma by plasma Epstein‐Barr virus DNA analysis in a surveillance program[J].K.C.Allen Chan,Emily C.W.Hung,John K.S.Woo,Paul K.S.Chan,Sing‐Fai Leung,Franco P.T.Lai,Anita S.M.Cheng,Sze Wan Yeung,Yin Wah Chan,Teresa K.C.Tsui,Jeffrey S.S.Kwok,Ann D.King,Anthony T.C.Chan,Andrew C.van Hasselt,Y.M.Dennis Lo.Cancer.2013(10)
[3]Current understanding and management of nasopharyngeal carcinoma[J].Tomokazu Yoshizaki,Makoto Ito,Shigekyuki Murono,Naohiro Wakisaka,Satoru Kondo,Kazuhira Endo.Auris Nasus Larynx.2011(2)
[4]Plasma Epstein‐Barr virus DNA screening followed by 18F‐fluoro‐2‐deoxy‐D‐glucose positron emission tomography in detecting posttreatment failures of nasopharyngeal carcinoma[J].Wen‐YiWang,Chih‐WenTwu,Wan‐YuLin,Rong‐SanJiang,Kai‐LiLiang,Kuan‐WenChen,Ching‐TeWu,Yi‐TingShih,Jin‐ChingLin.Cancer.2011(19)
[5]Expression of Epstein‐Barr virus‐encoded LMP1 and hTERT extends the life span and immortalizes primary cultures of nasopharyngeal epithelial cells[J].Yim‐LingYip,Chi‐ManTsang,WenDeng,Pak‐YanCheung,YueshengJin,Annie Lai‐ManCheung,Maria LiLung,Sai‐WahTsao.J.Med.Virol..2010(10)
[6]Different Clinical Significance of Pre-and Post-treatment Plasma Epstein–Barr Virus DNA Load in Nasopharyngeal Carcinoma Treated with Radiotherapy[J].Xue Hou,Chong Zhao,Ying Guo,Fei Han,Li-Xia Lu,Shao-Xiong Wu,Su Li,Pei-Yu Huang,He Huang,Li Zhang.Clinical Oncology.2010(2)
[7]Global Cancer Statistics,2002[J].D.MaxParkin,FreddieBray,J.Ferlay,PaolaPisani.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2009(2)
[8]陳裕鋒.鼻咽癌高危人群中鼻咽拭子EB病毒DNA定量檢測及其在鼻咽癌篩查中的應(yīng)用[D].廣西醫(yī)科大學(xué),2015.