研究背景

蒼術(shù)酮是我國傳統(tǒng)中藥白術(shù)及蒼術(shù)揮發(fā)油的主要活性成分，是評價白術(shù)藥材及其制劑的重要依據(jù)之一。該物質(zhì)屬于倍半萜類化合物，在中國有著悠久的歷史?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)蒼術(shù)酮可用于治療風(fēng)濕性疾病、消化系統(tǒng)疾病、保肝和流感等。在20世紀(jì)80年代早期，發(fā)現(xiàn)蒼術(shù)酮具有顯著的保肝活性，可預(yù)防四氯化碳引起的肝損傷，并抑制叔丁基過氧化氫引起的肝細(xì)胞dna損傷。近年來，研究報(bào)道蒼術(shù)酮還具有抗炎、抗傷害感受性、抗病毒、抗?jié)兒外c/鉀-腺苷三磷酸酶抑制活性[1]。

分析測定

文獻(xiàn)報(bào)道了一種同時測定白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ，白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ，白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ和蒼術(shù)酮等多成分含量的HPLC-DAD分析方法。具體參數(shù)包括：波長切換技術(shù)方法：HPLC-DAD梯度洗脫-波長切換法；色譜柱：Waters Sunfire C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：乙腈-水梯度洗脫；檢測波長：220nm(白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ,Ⅲ及蒼術(shù)酮)，276nm(白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ)；進(jìn)樣量：10μL；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃。結(jié)果：白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ，白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ，白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ和蒼術(shù)酮線性關(guān)系良好，加樣回收率分別在98.48%-102.80%，96.72%-102.40%，95.19%-100.70%，97.15%-100.90%，平均加樣回收率分別為100.40%(RSD=1.7%)，99.48%(RSD=1.8%)，97.47%(RSD=1.8%)，98.90%(RSD=1.3%)。該方法簡單，準(zhǔn)確，靈敏度高，重復(fù)性好，可用于白術(shù)的質(zhì)量評價[3]。

應(yīng)用

蒼術(shù)酮在制備抗肝癌分子靶標(biāo)藥物中具有應(yīng)用潛力。從相應(yīng)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，蒼術(shù)酮具有抑制肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的性質(zhì)和作用，且在動物實(shí)驗(yàn)中也進(jìn)一步證明了蒼術(shù)酮具有抑制裸鼠肝癌腫瘤生長的功能，對裸鼠有顯著的抗腫瘤作用。這些結(jié)果表明，蒼術(shù)酮可用于制備抗肝癌分子靶標(biāo)藥物，具有良好的應(yīng)用前景和應(yīng)用價值[4]。

有關(guān)研究

醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域報(bào)道了一種以β環(huán)糊精包合白術(shù)藥材中蒼術(shù)酮成分的炮制方法。該方法包括如下步驟：1)取白術(shù)藥材，加入1～3倍量質(zhì)量分?jǐn)?shù)為33.3%～66.6%的β環(huán)糊精水共混物，攪拌均勻；2)對藥材β環(huán)糊精水的混合物進(jìn)行45～95℃加熱1～5h處理，加熱過程中及時補(bǔ)充蒸發(fā)損耗的水；3)取出藥材，40～80℃干燥3～9h。本方法用β環(huán)糊精包合白術(shù)藥材中蒼術(shù)酮成分，將蒼術(shù)酮從白術(shù)藥材油室組織分離并進(jìn)行保護(hù)，可有效避免粉碎過程中因油室組織被破壞而蒼術(shù)酮嚴(yán)重流失的情況發(fā)生，提升藥材粉碎后應(yīng)用于中藥制劑過程中的穩(wěn)定性，有利于藥材的質(zhì)量控制[5]。

氧化動力學(xué)

利用GC/MS法跟蹤分析蒼術(shù)酮純品的分解過程，得到5種分解產(chǎn)物——與文獻(xiàn)報(bào)道的蒼術(shù)酮轉(zhuǎn)變成2種產(chǎn)物存在較大的差異。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究了蒼術(shù)酮的氧化反應(yīng)機(jī)理：蒼術(shù)酮與水易進(jìn)行1,4加成反應(yīng)，生成半羧醛羥基.水的存在使半羧醛羥基開環(huán)并導(dǎo)致C-O鍵斷裂，生成羰基，羰基進(jìn)一步被氧化成羧基。由于羧基上的碳原子為sp²雜化，羥基可從雜化軌道平面兩側(cè)進(jìn)攻羧基，并與羧基進(jìn)行分子內(nèi)脫水反應(yīng)，故而可生成白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ及表白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ，而白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的7位C上的-H很活潑，易被-OH取代而生成白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ，白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ不穩(wěn)定，易使分子內(nèi)脫水生成白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ。此外，白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ與白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ可進(jìn)行分子間脫水反應(yīng)，生成雙白術(shù)內(nèi)酯。通過定量分析純品和白術(shù)原藥材中蒼術(shù)酮在氧化過程中的相對含量，計(jì)算反應(yīng)的動力學(xué)參數(shù)，得出蒼術(shù)酮純品的反應(yīng)速率方程為Rate1=k′1[x]1.84，活化能為58.05kJ/mol；原藥材中蒼術(shù)酮的反應(yīng)速率方程為Rate2=k′2[x]1.89，活化能為63.17kJ/mol[6]。

藥理研究

為了探討蒼術(shù)酮對人肝癌細(xì)胞MHCC97-H增殖，遷移，侵襲，凋亡的影響及機(jī)制。采用體外培養(yǎng)的方法培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞MHCC97-H，采用CCK-8法檢測細(xì)胞活性，計(jì)算蒼術(shù)酮的半數(shù)抑制濃度(IC50)。將MHCC97-H細(xì)胞分為對照組和蒼術(shù)酮5，10，20μmol·L(-1)濃度組，分別干預(yù)24 h。采用克隆形成實(shí)驗(yàn)(培養(yǎng)2周)檢測細(xì)胞增殖能力；Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移，侵襲能力；Annexin V/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡率；Western Blot法檢測細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，蒼術(shù)酮干預(yù)MHCC97-H細(xì)胞24 h的IC50為24.97μmol·L(-1)。與對照組比較，蒼術(shù)酮10,20μmol·L(-1)組的MHCC97-H細(xì)胞集落數(shù)顯著減少(P<0.01)，細(xì)胞凋亡率顯著升高(P<0.01)，MHCC97-H細(xì)胞E-鈣黏蛋白(E-cad)表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.01)；蒼術(shù)酮5，10，20μmol·L(-1)組的MHCC97-H細(xì)胞遷移數(shù)及侵襲數(shù)均顯著減少(P<0.05，P<0.01)，MHCC97-H細(xì)胞α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)，波形蛋白(Vimentin)，N-鈣黏蛋白(N-cad)，基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)，MMP-9，B細(xì)胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(P<0.01)，金屬蛋白酶組織抑制因子2(TIMP-2)，Bcl-2關(guān)聯(lián)X蛋白(Bax)，裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved caspase-3)蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.05，P<0.01)。通過上述研究可以得出結(jié)論：蒼術(shù)酮能夠抑制人肝癌細(xì)胞MHCC97-H增殖，遷移和侵襲，并促進(jìn)其凋亡，可能與調(diào)控細(xì)胞EMT及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)有關(guān)[7]。

參考文獻(xiàn)

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