背景[1-3]
結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)是一種固體鑒別培養(yǎng)基，主要用于大腸菌群的固體平板檢測(cè)。
成分(g/L)：蛋白胨7.0，酵母浸粉3.0，氯化鈉5.0，乳糖10.0，膽鹽1.5，結(jié)晶紫0.002，中性紅0.03，瓊脂15.0，pH值7.4±0.1。
結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)
結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)用法：
稱取結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)干粉41.5g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，煮沸不要超過(guò)2分鐘。取適宜稀釋度樣品液1ml，加入到無(wú)菌平皿中心，將冷至45-50℃的VRBA 10-15ml傾注于平皿中。小心旋轉(zhuǎn)平皿將培養(yǎng)基與樣液充分混勻。凝固后，再加3-4ml VRBA覆蓋平板表層，翻轉(zhuǎn)平板，置于36±1℃培養(yǎng)18-24小時(shí)。無(wú)需高壓滅菌。臨用時(shí)制備，不得超過(guò)3小時(shí)。
結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)檢驗(yàn)原理：
蛋白胨和酵母浸粉提供碳氮源、維生素、生長(zhǎng)因子和輔酶等其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；氯化鈉維持均衡的滲透；乳糖為可發(fā)酵碳水化合物，可作為一種能量來(lái)源；結(jié)晶紫對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌如葡萄球菌、白喉?xiàng)U菌，以及綠膿桿菌、白念珠菌、表皮癬菌有殺滅作用，對(duì)其他革蘭氏陰性菌和抗酸菌幾乎無(wú)作用；中性紅為指示劑；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)外觀：
干粉培養(yǎng)基為淡紅色粉末。
制備好的培養(yǎng)基為紫紅色透明固態(tài)。
使用結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)的注意事項(xiàng)：
本品僅限于實(shí)驗(yàn)室使用。
干粉培養(yǎng)基出現(xiàn)過(guò)期、結(jié)塊或變色，請(qǐng)勿使用。
結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)保存條件和保質(zhì)期：
干粉培養(yǎng)基在5-30°C下干燥避光保存，其保質(zhì)期為三年。
制備好的培養(yǎng)基須在2-8°C干燥避光保存。
應(yīng)用[4][5]
結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)可以用于食品中大腸菌群檢測(cè)方法與指標(biāo)值對(duì)應(yīng)關(guān)系的研究
國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定食品中大腸菌群檢測(cè)方法為：GB/T 4789.3-2003(一種方法,簡(jiǎn)稱2003版方法,單位:MPN/100g(mL))與GB 4789.3-2010(第一法：大腸菌群MPN計(jì)數(shù)法,簡(jiǎn)稱2010版MPN計(jì)數(shù)法,單位:MPN/g(mL);第二法：使用結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)的大腸菌群平板計(jì)數(shù)法,簡(jiǎn)稱VRBA法,單位：CFU/g(mL))。目前,產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中大腸菌群指標(biāo)值大多數(shù)是根據(jù)2003版方法制定,因缺乏與2010版相對(duì)應(yīng)的指標(biāo)值,許多企業(yè)及檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)在檢測(cè)時(shí)對(duì)方法選取及指標(biāo)值判斷易產(chǎn)生混亂造成漏檢。因此,本論文對(duì)2010版大腸菌群檢測(cè)方法與產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中大腸菌群指標(biāo)值的對(duì)應(yīng)關(guān)系進(jìn)行了研究。
本研究首先通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)菌株試驗(yàn)及樣品驗(yàn)證對(duì)比,分析了2003版方法與2010版MPN計(jì)數(shù)法的靈敏度及區(qū)別,并對(duì)其差異原因進(jìn)行分析；其次對(duì)2010版兩種檢測(cè)方法的靈敏度、適用性進(jìn)行分析,最后對(duì)醬腌菜、冰淇淋、糕點(diǎn)、肉制品中大腸菌群檢測(cè)方法與產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)值的對(duì)應(yīng)關(guān)系進(jìn)行了研究,建立了與2010版MPN計(jì)數(shù)法相對(duì)應(yīng)的4大類(lèi)食品中大腸菌群指標(biāo)值。同時(shí),對(duì)4大類(lèi)食品設(shè)置指標(biāo)值的大小及適用不同檢測(cè)方法的原因進(jìn)行了探討。
主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)論如下：(1)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)菌株及50份樣品驗(yàn)證,對(duì)2003版方法與2010版MPN計(jì)數(shù)法進(jìn)行對(duì)比研究,結(jié)果表明2003版方法靈敏度較低,原因在于2010版初發(fā)酵培養(yǎng)基中月桂基硫酸鈉代替了2003版初發(fā)酵培養(yǎng)基中的膽鹽,且月桂基硫酸鈉對(duì)大腸菌群有修復(fù)作用。(2)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)菌株對(duì)結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)VRBA法與平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行對(duì)比研究,檢測(cè)結(jié)果分別為：3.9×106MPN/g(mL)、4.7×106MPN/g(mL),證實(shí)結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)VRBA法在大腸桿菌檢測(cè)中有較好靈敏度。用2010版MPN計(jì)數(shù)法與VRBA法對(duì)120份樣品進(jìn)行檢測(cè),不合格率分別為：10.8%、12.5%,差異較小,且VRBA法有較好靈敏度。但MPN計(jì)數(shù)法為最大概率值,結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)VRBA法為準(zhǔn)確定量值,建議國(guó)家在要求比較嚴(yán)格的食品種類(lèi),例如嬰幼兒及老年食品中采取VRBA法檢測(cè),且對(duì)相應(yīng)指標(biāo)值進(jìn)行修改。
參考文獻(xiàn)
[1]Curcumin loaded nanoemulsions/pectin coatings for refrigerated chicken fillets[J].Entsar S.Abdou;;Gehan F.Galhoum;;Entsar N.Mohamed.Food Hydrocolloids.2018
[2]Comparative evaluation of spoilage-related bacterial diversity and metabolite profiles in chilled beef stored under air and vacuum packaging[J].Ahmad Rois Mansur;;Eun-Ji Song;;Yong-Sun Cho;;Young-Do Nam;;Yun-Sang Choi;;Dae-Ok Kim;;Dong-Ho Seo;;Tae Gyu Nam.Food Microbiology.2019
[3]Exploring the antivirulent and sea food preservation efficacy of essential oil combined with DNase on Vibrio parahaemolyticus[J].Sanaulla Farisa Banu;;Durairajan Rubini;;Ramar Murugan;;Vellingiri Vadivel;;Shanmugaraj Gowrishankar;;Shunmugiah Karutha Pandian;;Paramasivam Nithyanand.LWT.2018
[4]Decontamination and survival of Enterobacteriaceae on shredded iceberg lettuce during storage[J].Tareq M.Osaili;;Akram R.Alaboudi;;Heba N.Al-Quran;;Anas A.Al-Nabulsi.Food Microbiology.2018
[5]劉耕典.食品中大腸菌群檢測(cè)方法與指標(biāo)值對(duì)應(yīng)關(guān)系的研究[D].陜西科技大學(xué),2016.