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瓊脂糖凝膠電泳,TAE和TBE緩沖液有區(qū)別嗎?

2024/10/12 13:59:11 作者:云霄
瓊脂糖凝膠電泳是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中分離鑒定核酸的常規(guī)方法,核酸是兩性電解質(zhì),其等電點(diǎn)為pH2-2.5,在常規(guī)的電泳緩沖液中(pH約8.5),核酸分子帶負(fù)電荷,在電場中向正極移動(dòng)。

通過電泳技術(shù),可以分離出不同大小和構(gòu)象的RNA分子,并通過觀察條帶的數(shù)量、大小和形態(tài),可以判斷出RNA分子的完整性。而在這個(gè)過程中,電泳緩沖液的主要作用就是保持pH,并使溶液具有一定的導(dǎo)電性。TAE(Tris-乙酸緩沖液)和TBE(TRIS-硼酸電泳緩沖液)是比較常用的緩沖液,它們到底有什么區(qū)別呢?

凝膠電泳

TAE(Tris-乙酸緩沖液)

優(yōu)點(diǎn):

①對于大于13kb的DNA片段,TAE緩沖液能取得更好的分離效果。

②在TAE緩沖液中,DNA的超螺旋狀態(tài)在電泳過程中能夠更好地保持其真實(shí)的相對分子質(zhì)量。

③適用于回收DNA片段,后續(xù)進(jìn)行酶切反應(yīng)等

缺點(diǎn):

緩沖容量小,TAE緩沖液在長時(shí)間電泳過程中可能會(huì)逐漸失去其pH緩沖能力,導(dǎo)致pH值發(fā)生變化。

TBE(TRIS-硼酸電泳緩沖液)

優(yōu)點(diǎn):

①緩沖能力相對更強(qiáng),即使在長時(shí)間電泳過程中也能保持pH值的恒定,且不容易導(dǎo)致電泳槽內(nèi)過熱。

②適用于電泳分離較小的片段,如小于1kb的片段。其高分辨率使得不同大小的分子更容易區(qū)分,從而提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

缺點(diǎn):

含有的硼酸成分,可能會(huì)對RNA、DNA的回收效率和后續(xù)的酶反應(yīng)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響。

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