在病理科,一例組織樣本精準(zhǔn)的檢驗(yàn)結(jié)果,固定是至關(guān)重要的一步驟。醫(yī)生常常把甲醛按照1:9的比例配置成10%的福爾馬林溶液,因?yàn)榧兹┧芤簼B透力強(qiáng),固定均勻,對(duì)組織收縮較少,能保存脂類和類脂體,對(duì)脂肪、神經(jīng)及髓鞘的固定效果很好。
福爾馬林溶液隨著時(shí)間和溫度的變化,其濃度也會(huì)發(fā)生變化,溫度低于-15℃,甲醛會(huì)出現(xiàn)明顯的甲醛分解現(xiàn)象,放置時(shí)間長(zhǎng)的甲醛溶液會(huì)有甲酸產(chǎn)生,使液體呈酸性,以上情況都會(huì)造成固定效果不佳問(wèn)題,長(zhǎng)期固定的組織也存在甲醛色素問(wèn)題。
經(jīng)過(guò)實(shí)踐,10%中性福爾馬林固定液(加入一定比例的磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉),其固定效果更佳,特別是對(duì)免疫組化、原位雜交、FISH、突變、PCR、二代測(cè)序等檢查效果更優(yōu)越,而且避免了甲醛色素的形成。
中性福爾馬林固定液pH值控制要點(diǎn)
1、磷酸鹽緩沖液的磷酸鹽的濃度不能太高,也不能太低,建議用0.02mol的濃度為宜,此濃度的滲透壓與細(xì)胞液和組織液的滲透壓相近。
2、pH7.2~7.4磷酸鹽緩沖液加福爾馬林混勻放置12小時(shí)后,其pH值會(huì)下降0.3左右,有的會(huì)下降更多,與所用原料(福爾馬林溶液)中的甲酸含量多少有關(guān)。
3、pH計(jì)建議選用三點(diǎn)式校正的并具有溫度補(bǔ)償?shù)膒H計(jì), 測(cè)量前必須對(duì)p H計(jì)進(jìn)行校正, 校正完畢后要驗(yàn)證校正是否到位。
4、pH計(jì)校正:一般選用pH4.0(鄰苯二甲酸氫鉀)、pH6.86(混合磷酸鹽)、pH9.18(四硼酸鈉)三用標(biāo)準(zhǔn)緩沖液(市面上用成品賣)來(lái)校正,校正過(guò)程必須按pH計(jì)的說(shuō)明書規(guī)定進(jìn)行,校正完畢后要驗(yàn)證校正是否到位。
5、驗(yàn)證校正是否到位:pH計(jì)的校正后,用蒸餾水沖洗,然后隨意放入校正用的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中,比如放入pH6.86(混合磷酸鹽)標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中,此時(shí)pH計(jì)顯示的值應(yīng)在6.84~6.88之間,如放入pH4.0(鄰苯二甲酸氫鉀)標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中,此時(shí)pH計(jì)顯示的值應(yīng)在3.98~4.02之間,如放入pH9.18(四硼酸鈉)標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中,此時(shí)pH計(jì)顯示的值應(yīng)在9.16~9.20之間,否則需重新校正pH計(jì)。
6、組織固定液測(cè)量時(shí)正確操作:用蒸餾水沖洗pH計(jì)(玻璃球部位)并用吸水紙吸盡水分,將pH計(jì)插入待測(cè)組織固定液中,輕輕振動(dòng)pH計(jì)(約10秒鐘),靜置pH計(jì),待pH計(jì)上的數(shù)值穩(wěn)定(不跳動(dòng))后便讀取其數(shù)字,此數(shù)字則是固定液的pH值。