背景^[1-3]

HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂是生物學(xué)研究中常用的一種緩沖溶液，用于細(xì)胞培養(yǎng)、組織運(yùn)輸和實(shí)驗(yàn)過(guò)程中細(xì)胞的清洗等。傳統(tǒng)的Hanks'平衡鹽溶液含有鈣和鎂離子，但也有一些修改版的配方，其中不含鈣和鎂（通常表示為HBSS without calcium and magnesium或HBSS-/-）。

HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂

HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂主要由以下幾種鹽組成：

氯化鈉（NaCl）：提供主要的滲透壓和離子平衡。

氯化鉀（KCl）：維持細(xì)胞內(nèi)外的鉀離子濃度梯度。

磷酸二氫鈉（Na2HPO4）和磷酸二氫鉀（KH2PO4）：作為緩沖系統(tǒng)，幫助維持溶液的pH值。

碳酸氫鈉（NaHCO3）：作為緩沖系統(tǒng)的一部分，幫助維持溶液的pH值。

HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂的使用場(chǎng)景包括：

細(xì)胞解離：某些細(xì)胞類型需要在沒(méi)有鈣和鎂的情況下進(jìn)行解離，因?yàn)檫@些離子可能促進(jìn)細(xì)胞之間的粘附。

細(xì)胞清洗：在細(xì)胞分選或其他實(shí)驗(yàn)操作中，可能需要使用不含鈣鎂的溶液來(lái)清洗細(xì)胞，以避免這些離子對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾。

細(xì)胞收集：在進(jìn)行某些細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)時(shí)，可能會(huì)使用不含鈣鎂的Hanks'平衡鹽溶液來(lái)收集細(xì)胞。

組織運(yùn)輸和保存：有時(shí)也會(huì)使用這種溶液來(lái)運(yùn)輸和短期保存組織樣本。

HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂注意事項(xiàng)：

使用前應(yīng)確認(rèn)溶液的pH值和滲透壓：確保它們適合特定的細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)要求。

無(wú)菌操作：在細(xì)胞培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)確保溶液是無(wú)菌的，以避免污染。

儲(chǔ)存條件：應(yīng)按照制造商的指導(dǎo)存儲(chǔ)溶液，并在打開(kāi)后盡快使用，避免污染。

HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂使用步驟:

1.預(yù)熱溶液：將HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂預(yù)熱至37°C，以模擬體內(nèi)溫度，減少對(duì)細(xì)胞的應(yīng)激。

2.清洗細(xì)胞：

將培養(yǎng)的細(xì)胞從培養(yǎng)容器中取出。

使用無(wú)菌吸管或移液器，輕輕吸除培養(yǎng)液。

用HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂的溶液輕輕沖洗細(xì)胞，去除殘留的培養(yǎng)液和代謝廢物。通常需要沖洗2-3次。

3.細(xì)胞解離：

如果需要進(jìn)行細(xì)胞解離，使用HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂可以減少細(xì)胞間的粘連，便于解離過(guò)程。

將HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂加入含有細(xì)胞的容器中，輕輕搖動(dòng)或吹打以幫助細(xì)胞解離。

4.細(xì)胞計(jì)數(shù)和稀釋：

可以使用HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂來(lái)稀釋細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，因?yàn)樗峁┝伺c細(xì)胞生長(zhǎng)相似的離子環(huán)境。

將適量的細(xì)胞懸液與HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂混合，然后使用細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。

5.細(xì)胞運(yùn)輸：

HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂也用于運(yùn)輸細(xì)胞，特別是當(dāng)需要在實(shí)驗(yàn)室之間轉(zhuǎn)移細(xì)胞時(shí)。

6.配制其他溶液：

HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂可以作為基礎(chǔ)溶液，用于配制其他細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)所需的溶液。

應(yīng)用^[4][5]

HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂可以用于阿司匹林對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞保護(hù)性自噬的作用及機(jī)制研究

研究阿司匹林對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞“保護(hù)性自噬”的作用及可能的機(jī)制。

方法1.通過(guò)TIMER和Prognsan數(shù)據(jù)庫(kù)分析自噬相關(guān)蛋白SQSTM1/p62在結(jié)腸癌中表達(dá)水平及其對(duì)生存期的影響;免疫組化分析SQSTM1/p62在結(jié)腸癌及癌旁組織中的表達(dá),并探討其表達(dá)水平與患者病理資料的相關(guān)性;

2.CCK-8、平板克隆形成、劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)阿司匹林對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116、SW480增殖、集落形成和遷移能力影響;利用HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂模擬體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)缺乏微環(huán)境,基于此分為4組:正常對(duì)照組、HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂干預(yù)組、低劑量阿司匹林+Hank’s干預(yù)組、高劑量阿司匹林+Hank’s干預(yù)組,HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)變化、透射電鏡觀察細(xì)胞自噬、Western blot檢測(cè)自噬及凋亡相關(guān)蛋白(p62、LC3、Bax、Bcl-2)的表達(dá);慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建HCT-116、SW480自噬研究的細(xì)胞模型,熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)上述4組細(xì)胞內(nèi)自噬流的變化;

3. Western blot檢測(cè)上述4組TRIM33蛋白的表達(dá)情況;利用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染TRIM33-si RNA,Western blot檢測(cè)敲降效率,在此基礎(chǔ)上將實(shí)驗(yàn)分為3組:陰性對(duì)照組、si-TRIM33組、阿司匹林+si-TRIM33組,透射電鏡用于觀察自噬、Western blot檢測(cè)TRIM33、p62、LC3蛋白表達(dá)的變化。

結(jié)果1.TIMER數(shù)據(jù)庫(kù)提示SQSTM1/p62在結(jié)腸癌中高表達(dá)(P<0.05);Prognsan數(shù)據(jù)庫(kù)提示SQSTM1/p62表達(dá)水平越高,患者預(yù)后越好;免疫組化結(jié)果示SQSTM1/p62在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)顯著高于癌旁組織(P<0.05),其表達(dá)水平與患者臨床病理資料均無(wú)關(guān)(P>0.05);

2.CCK-8結(jié)果顯示,阿司匹林抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖,其中HCT-116在24h和48h的IC50分別為2.96、1.34mmol/L,SW480在24h和48h的IC50分別為1.74、1.37mmol/L,選取0.5mmol/L、1mmol/L進(jìn)行下列實(shí)驗(yàn);平板克隆形成、劃痕愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示阿司匹林抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的克隆形成及遷移能力(P<0.05),HE染色結(jié)果提示:與正常對(duì)照組相比,HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂干預(yù)組細(xì)胞形態(tài)變圓,細(xì)胞密度顯著減少,在HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂干預(yù)組的基礎(chǔ)上阿司匹林處理后,細(xì)胞核位置深染,胞質(zhì)濃縮,細(xì)胞密度進(jìn)一步減少;透射電鏡結(jié)果表明,與HCT-116正常組細(xì)胞相比,Hank’s干預(yù)組胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)大量自噬小體及自噬溶酶體,在Hank’s干預(yù)組的基礎(chǔ)上給予阿司匹林后,胞質(zhì)內(nèi)自噬小體和自噬溶酶體顯著減少,線粒體嵴斷裂;Western blot結(jié)果顯示:與正常對(duì)照組相比,HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂干預(yù)組p62蛋白表達(dá)水平下降,LC3II/ACTB、Bax/Bcl-2的表達(dá)上升(P<0.05),與Hank’s干預(yù)組相比,阿司匹林干預(yù)后p62、Bax/Bcl-2蛋白表達(dá)上升,LC3II/ACTB的表達(dá)下降(P<0.05);流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡結(jié)果顯示:與對(duì)照組結(jié)腸癌細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞熒光表達(dá)率約達(dá)90%以上,提示細(xì)胞系構(gòu)建成功;激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)自噬流結(jié)果顯示:與對(duì)照組細(xì)胞相比,Hank’s干預(yù)組細(xì)胞內(nèi)紅綠色熒光斑點(diǎn)數(shù)目明顯增加,表明自噬被激活;與Hank’s干預(yù)組相比,阿司匹林干預(yù)后出現(xiàn)紅綠色熒光均減弱,說(shuō)明阿司匹林可以抑制Hank’s誘導(dǎo)的自噬流.

參考文獻(xiàn)

[1]DHOK Exerts Anti-Cancer Effect Through Autophagy Inhibition in Colorectal Cancer[J].Shu Yuhan;Sun Xin;Ye Guiqin;Xu Mengting;Wu Zhipan;Wu Caixia;Li Shouxin;Tian Jingkui;Han Haote;Zhang Jianbin.Frontiers in Cell and Developmental Biology,2021

[2]The Role of Chaperone-Mediated Autophagy in Bortezomib Resistant Multiple Myeloma[J].Nikesitch Nicholas;Rebeiro Patricia;Ho Lye Lin;Pothula Srinivasa;Wang Xin Maggie;Khong Tiffany;Quek Hazel;Spencer Andrew;Lee Cheok Soon;Roberts Tara L.;Ling Silvia C.W..Cells,2021

[3]Synthesis of aspirin-curcumin mimic conjugates of potential antitumor and anti-SARS-CoV-2 properties[J].Srour Aladdin M.;Panda Siva S.;Mostafa Ahmed;Fayad Walid;El-Manawaty May A.;A.F.Soliman Ahmed;Moatasim Yassmin;El Taweel Ahmed;Abdelhameed Mohamed F.;Bekheit Mohamed S.;Ali Mohamed A.;Girgis Adel S..Bioorganic Chemistry,2021

[4]Inhibition of Autophagy Promotes Hemistepsin A-Induced Apoptosis via Reactive Oxygen Species-Mediated AMPK-Dependent Signaling in Human Prostate Cancer Cells[J].Kim KwangYoun;Yun UnJung;Yeom SeungHee;Kim SangChan;Lee HuJang;Ahn SoonCheol;Park KwangIl;Kim YoungWoo.Biomolecules,2021

[5]吳曉婷.阿司匹林對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞保護(hù)性自噬的作用及機(jī)制研究[D].寧夏醫(yī)科大學(xué),2022.