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5’DNA腺苷化試劑盒的介紹

2020/2/11 8:32:33

背景及概述[1]

試劑盒是一種將測定一種成分所需要的2種或2種以上的試劑及實(shí)驗(yàn)室一般用品連同操作說明書包裝在一起,形成商品化的試劑單位,即由廠家提供給用戶使用的一種套裝試劑,使用者除用自備的蒸餾水或試劑盒提供的緩沖液進(jìn)行復(fù)溶試劑的操作外不需要作任何試劑配制。目前檢測試劑已廣泛采用這一方式提供,kit的應(yīng)用不但節(jié)約人力減少配制誤差,而且有利于試劑質(zhì)量的保證和實(shí)驗(yàn)室間方法學(xué)的統(tǒng)一,提高了可比性。腺苷為一天然核苷酸,是機(jī)體代謝的中間產(chǎn)物,也是體內(nèi)重要活性成分之一。其作用系通過激活腺苷受體(A受體)而實(shí)現(xiàn)。在心房、竇房結(jié)及房室結(jié),腺苷通過與A受體結(jié)合而激活G蛋白偶聯(lián)的鉀通道,使K+外流增加,細(xì)胞膜超極化而降低自律性。它還能明顯增加cGMP水平,延長房室結(jié)的ERP和減慢傳導(dǎo),抑制交感神經(jīng)或異丙腎上腺素所致早后、遲后除極而發(fā)揮抗心律失常作用。

5’DNA腺苷化試劑盒能將DNA寡核苷酸5’端腺苷化,試劑盒操作簡便高效,反應(yīng)需要MthRNA連接酶、ATP和5’-磷酸化的單鏈DNA。試劑盒經(jīng)過優(yōu)化,無論有無3´-teminator,都能夠生成腺苷化的DNA。通常該試劑盒能將95%的pDNA轉(zhuǎn)化成AppDNA,高效的轉(zhuǎn)化不僅增加產(chǎn)量,還能避免膠回收提純步驟。5’DNA腺苷化試劑盒組份:MthRNA連接酶(重組酶)、5´DNA腺苷化緩沖液(10X)及1mMATP。5’DNA腺苷化試劑盒周轉(zhuǎn)率低,需要約等量摩爾濃度的酶和底物DNA相互作用。在二代測序cDNA文庫構(gòu)建實(shí)驗(yàn)中,預(yù)腺苷化DNA的連接頭可用于RNA3´末端的連接。

主要參考資料

[1] 協(xié)和醫(yī)學(xué)詞典

[2] 最新藥物手冊(cè)

 

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