背景^[1-3]

免疫染色封閉液是一種用于免疫組化或免疫熒光染色的試劑，其主要作用是防止非特異性染色和背景噪音。該液體通常由抗體、聚合物和其他化學(xué)物質(zhì)組成，可以與細(xì)胞或組織中的抗原結(jié)合，形成復(fù)合物，從而使特異性染色更加明顯和準(zhǔn)確。

免疫染色封閉液通常需要在染色前預(yù)先加入到樣品中，并與抗體一起孵育。孵育時間和溫度等因素可能會影響封閉液的效果，因此需要根據(jù)具體的實驗條件進行優(yōu)化。在封閉液中，聚合物通常起到交聯(lián)作用，使抗體與抗原結(jié)合更加牢固，從而減少非特異性染色的發(fā)生。

除了用于免疫組化和免疫熒光染色外，免疫染色封閉液還可以用于其他一些實驗中，如Western blotting、ELISA等。在這些實驗中，封閉液的作用是防止非特異性抗體與膜上的蛋白質(zhì)結(jié)合，從而減少背景噪音和假陽性結(jié)果的發(fā)生。

免疫染色封閉液

免疫染色封閉液是在免疫染色過程中使用的一種液體，其主要作用是封閉樣本中的非特異性抗原，以減少背景染色和干擾因素。它通常含有可溶性蛋白、血清或血清替代物，以及補體或其他阻斷劑，這些成分能夠阻塞非特異性結(jié)合位點，降低非特異性結(jié)合和背景信號。

使用免疫染色封閉液的一般步驟包括：首先，固定并洗滌細(xì)胞或組織樣本，確保樣本的清潔；然后，加入適量免疫染色封閉液，使其完全覆蓋樣本；接著，在搖床上緩慢搖動，通常封閉60分鐘；最后，進行一抗孵育等后續(xù)操作。

免疫染色封閉液僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于其他非科研用途。在使用過程中，應(yīng)嚴(yán)格遵循產(chǎn)品說明和相關(guān)操作規(guī)范，確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

應(yīng)用^[4-5]

免疫染色封閉液可以用于人參皂苷Rd對氧化低密度脂蛋白活化肝星狀細(xì)胞的抑制作用及其機制的初步研究

采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)活化HSCs為模型,探討人參皂苷Rd在肝纖維化中的作用及其相關(guān)機制,為人參皂苷Rd成藥提供思路。方法1 MTT法檢測人參皂苷Rd對HSCs活力和增殖的影響96孔板中接種細(xì)胞,每組6個復(fù)孔。12小時后加藥處理,繼續(xù)培養(yǎng)24小時和48小時后加入MTT工作液,再繼續(xù)培養(yǎng)4小時后加入DMSO終止液,搖勻后492 nm測吸光度值。2 ox-LDL活化HSCs完全培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞株HSC-T6,待細(xì)胞長至培養(yǎng)瓶底面積80%時,消化細(xì)胞并接種24孔板,12小時后加入10μg/ml ox-LDL,繼續(xù)培養(yǎng)48小時。3實驗分組及加藥處理實驗分為4組:空白對照組、模型組、低劑量組、高劑量組;按照每孔2.5×105個細(xì)胞接種12孔板,12小時后按上述分組依次加入PBS、10μg/ml ox-LDL、10μg/ml ox-LDL+20μmol/L Rd、10μg/ml ox-LDL+40μmol/L Rd,繼續(xù)培養(yǎng)48小時。4膽固醇氧化酶終點法檢測HSCs總膽固醇含量細(xì)胞培養(yǎng)及加藥處理后,離心收集細(xì)胞沉淀并分成兩份,采用RIPA裂解液提取總蛋白和異丙醇加超聲提取總膽固醇;采用BCA法測定蛋白總濃度,使用膽固醇(CHO酶法)試劑盒測定總膽固醇含量;以各分組細(xì)胞總膽固醇/各分組細(xì)胞總蛋白(mg/g)作為各分組細(xì)胞總膽固醇含量的比較。5油紅染色法觀察HSCs脂質(zhì)攝入6孔板中細(xì)胞爬片及加藥處理,4%多聚甲醛固定細(xì)胞,去離子水洗片,加入油紅工作液避光染色,60%異丙醇漂洗后去離子水洗凈,顯微鏡下觀察拍照。6免疫熒光檢測HSCs膠原蛋白表達(dá)6孔板中細(xì)胞爬片及加藥處理,4%多聚甲醛固定細(xì)胞,免疫染色封閉液室溫封閉,滴加Anti-Collagen I抗體后于保濕盒中4℃避光孵育過夜;加入FITC標(biāo)記羊抗兔IgG,室溫避光孵育后DAPI染色,避光漂洗后加入抗熒光淬滅封片液,倒置熒光顯微鏡觀察拍照。

參考文獻

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