背景[1-3]
營(yíng)養(yǎng)瓊脂是一種常用的微生物培養(yǎng)基,主要用于一般細(xì)菌的培養(yǎng)。其成分主要包括蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉以及瓊脂。這些成分提供了細(xì)菌生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。其中,蛋白胨和牛肉膏富含氮源、碳源以及多種維生素,是細(xì)菌生長(zhǎng)的重要能量來(lái)源;氯化鈉則用于調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的滲透壓,使其接近細(xì)菌生長(zhǎng)的自然環(huán)境;瓊脂則作為凝固劑,使培養(yǎng)基形成固體狀態(tài),便于細(xì)菌在其表面生長(zhǎng)并形成菌落。
營(yíng)養(yǎng)瓊脂的制備過(guò)程相對(duì)簡(jiǎn)單,主要是將各成分溶解于蒸餾水中,加熱溶解,然后校正pH值至適宜范圍,最后分裝、滅菌即可。根據(jù)使用目的的不同,瓊脂的用量也會(huì)有所調(diào)整。例如,用于菌落計(jì)數(shù)時(shí),瓊脂量通常為1.5%;而用于制作平板或斜面時(shí),瓊脂量則為2%。
此外,市場(chǎng)上也有現(xiàn)成的營(yíng)養(yǎng)瓊脂藥品供應(yīng),這些產(chǎn)品已經(jīng)調(diào)配好各成分的比例,并調(diào)整了pH值,用戶只需加水后即可直接制作培養(yǎng)基,無(wú)需自行配制。這為實(shí)驗(yàn)室工作提供了極大的便利。
營(yíng)養(yǎng)瓊脂
營(yíng)養(yǎng)瓊脂在微生物學(xué)、食品科學(xué)、醫(yī)藥等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。例如,在食品工業(yè)中,營(yíng)養(yǎng)瓊脂可用于檢測(cè)食品中的微生物污染情況;在醫(yī)藥領(lǐng)域,它可用于細(xì)菌的培養(yǎng)和鑒定,為疾病的診斷和治療提供依據(jù)。
雖然營(yíng)養(yǎng)瓊脂為細(xì)菌的生長(zhǎng)提供了良好的環(huán)境,但并非所有細(xì)菌都能在其上生長(zhǎng)。因此,在選擇培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)根據(jù)目標(biāo)細(xì)菌的特性進(jìn)行選擇。同時(shí),制備和使用營(yíng)養(yǎng)瓊脂時(shí),也應(yīng)注意遵守實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范,避免交叉污染和其他安全問(wèn)題。
應(yīng)用[4-5]
營(yíng)養(yǎng)瓊脂可以用于鐘山區(qū)雞沙門(mén)氏菌病病原分離及耐藥性研究
沙門(mén)氏菌病是一種人畜共患病,而且隨著抗菌藥物的濫用,沙門(mén)氏菌耐藥性越來(lái)越強(qiáng),使得該病的防控變得越來(lái)越復(fù)雜?;诹P(pán)水市鐘山區(qū)雞沙門(mén)氏菌病比較常見(jiàn),且防控困難的現(xiàn)實(shí),本研究在對(duì)六盤(pán)水市鐘山區(qū)沙門(mén)氏菌病進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上,開(kāi)展了沙門(mén)氏菌的分離鑒定、藥敏試驗(yàn)、耐藥基因分析等研究。
1. 鐘山區(qū)雞沙門(mén)氏菌病流行病學(xué)調(diào)查及其病原菌分離與鑒定。本研究于2017年1月~2019年12月期間對(duì)兩種不同養(yǎng)殖方式的6個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)的雞群進(jìn)行定期采樣(每?jī)蓚€(gè)月采集一次血清樣本),通過(guò)平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)沙門(mén)氏菌特異性抗體;通過(guò)臨床癥狀觀察和系統(tǒng)的病理剖檢對(duì)發(fā)病雞進(jìn)行初步診斷,然后采集病雞的肝臟、脾臟、心臟組織樣本進(jìn)行沙門(mén)氏菌分離,分別使用普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)肉湯和麥康凱瓊脂固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),觀察細(xì)菌生長(zhǎng)狀態(tài);通過(guò)革蘭氏染色觀察細(xì)菌形態(tài);利用14種生化管對(duì)分離菌進(jìn)行生化特性鑒定;對(duì)3株分離菌的16S r DNA基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測(cè)序及遺傳進(jìn)化分析。平板凝集試驗(yàn)結(jié)果顯示,所調(diào)查的養(yǎng)雞場(chǎng)中沙門(mén)氏菌平均檢出率為22.3%,其中地面平養(yǎng)方式養(yǎng)雞場(chǎng)的平均檢出率為26.4%,籠養(yǎng)方式養(yǎng)雞場(chǎng)的平均檢出率為18.4%,可見(jiàn)地面平養(yǎng)雞群的沙門(mén)氏菌病相較籠養(yǎng)雞群更為嚴(yán)重。對(duì)發(fā)病雞的臨床診斷結(jié)果顯示,病雞精神萎頓,怕冷且不愿走動(dòng),羽毛松亂,翅下垂,腹瀉且糞便在泄殖腔周?chē)拾咨珴{糊狀;剖檢可見(jiàn)其肝臟、脾臟等腫大充血,且脾臟表面有結(jié)節(jié),腹腔內(nèi)存在腹水,腸道炎癥等,其癥狀和剖檢病變與雞沙門(mén)氏菌病相符。
分離培養(yǎng)結(jié)果顯示,分離菌在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的菌落為直徑2~4mm,白色半透明、濕潤(rùn)光滑、圓形且邊緣整齊,在麥康凱培養(yǎng)基上的菌落為無(wú)色透明、圓形隆起,均與沙門(mén)氏菌的培養(yǎng)特性一致。革蘭氏染色結(jié)果顯示,分離菌為大小均勻、兩端鈍圓、無(wú)莢膜、無(wú)芽孢的紅色短桿菌,符合典型的沙門(mén)氏菌革蘭氏染色特征。
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