背景^[1-3]

臺盼藍(lán)染色細(xì)胞存活率檢測試劑盒是一種常用的細(xì)胞活性檢測試劑盒，利用臺盼藍(lán)染色技術(shù)來檢測細(xì)胞的存活狀態(tài)。臺盼藍(lán)是一種能夠透過死亡或受損細(xì)胞膜的染料，可以將死亡或受損細(xì)胞染成藍(lán)色，而活細(xì)胞則不會被染色。通過染色后的細(xì)胞計數(shù)，可以計算出細(xì)胞的存活率。

臺盼藍(lán)染色細(xì)胞存活率檢測試劑盒

臺盼藍(lán)染色細(xì)胞存活率檢測試劑盒的使用方法一般包括以下幾個步驟：

1.收集細(xì)胞樣品并進(jìn)行離心，去除上清液，用適量的細(xì)胞重懸液重懸細(xì)胞沉淀。

將等體積的臺盼藍(lán)染色液加入細(xì)胞懸液中，充分混勻后，染色一段時間（一般為3-5分鐘）。

2.染色完成后，將細(xì)胞懸液在顯微鏡下直接計數(shù)或拍照后計數(shù)，記錄染成藍(lán)色的3.死亡或受損細(xì)胞數(shù)目和總細(xì)胞數(shù)目。

4.計算細(xì)胞存活率：細(xì)胞存活率=(總細(xì)胞數(shù)目-藍(lán)色細(xì)胞數(shù)目)/總細(xì)胞數(shù)目×100%。

使用該試劑盒時，只需將待測樣品加入到含有臺盼藍(lán)染料的反應(yīng)體系中，經(jīng)過一定的反應(yīng)時間后，即可通過顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀分析來判斷細(xì)胞的存活情況。

臺盼藍(lán)染色細(xì)胞存活率檢測試劑盒具有操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確可靠等優(yōu)點(diǎn)，適用于各種類型的細(xì)胞存活率檢測，包括腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞、干細(xì)胞等。

臺盼藍(lán)染色細(xì)胞存活率檢測試劑盒的優(yōu)點(diǎn)包括操作簡便、快速、結(jié)果準(zhǔn)確等。該試劑盒適用于各種類型的細(xì)胞，包括貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞等，常用于科研和藥物篩選等領(lǐng)域。然而，由于臺盼藍(lán)染色的原理是基于細(xì)胞膜的完整性，因此對于一些細(xì)胞膜通透性增高的細(xì)胞或某些特定情況下，可能會出現(xiàn)假陽性的結(jié)果。此時需要結(jié)合其他檢測方法進(jìn)行判斷。

應(yīng)用^[4][5]

臺盼藍(lán)染色細(xì)胞存活率檢測試劑盒可以用于線粒體功能障礙介導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在心肌缺血再灌注損傷中對心肌細(xì)胞的功能影響及機(jī)制研究

明確H/R過程中,心肌細(xì)胞收縮功能、細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]cyt濃度以及鈣敏感性的變化并探討可能存在的機(jī)制;(二)明確H/R過程中,線粒體結(jié)構(gòu)和功能的改變情況并探究有效的保護(hù)方案;(三)明確H/R過程中,通過保護(hù)線粒體的結(jié)構(gòu)和功能對ERS通路激活以及心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能影響并探討可能存在的機(jī)制。

研究方法(一)原代分離成年大鼠心肌細(xì)胞H/R模型的構(gòu)建研究采用Langendorff離體心臟灌流系統(tǒng)分離原代的成年大鼠心肌細(xì)胞,隨機(jī)分為對照組(CTL組)和缺氧/復(fù)氧(H/R組),利用Mayo Clinic構(gòu)建的氣液混合瓶和流量控制泵系統(tǒng),動態(tài)調(diào)控細(xì)胞培養(yǎng)皿所在腔室內(nèi)氣體和灌注液氧濃度。CTL組持續(xù)灌注37℃正常氧濃度含葡萄糖的1.8 mmol/L Ca2+Tyrode溶液;H/R組首先在低氧環(huán)境中灌注37℃低氧濃度不含葡萄糖的1.8 mmol/L Ca2+Tyrode溶液30 min,之后在正常氧濃度環(huán)境中恢復(fù)灌注37℃正常氧濃度含葡萄糖的1.8 mmol/L Ca2+Tyrode溶液120min,用來模擬心肌細(xì)胞H/R的過程。利用IonOptix系統(tǒng)、激光掃描共聚焦熒光顯微鏡(laser scanning confocal microscopy,LSCM)、免疫熒光法、氧濃度測定探針及臺盼藍(lán)染色細(xì)胞存活率檢測試劑盒等,對原代分離的成年大鼠心肌細(xì)胞的純度以及模型構(gòu)建可靠性等進(jìn)行研究和驗(yàn)證。

利用臺盼藍(lán)染色細(xì)胞存活率檢測試劑盒臺盼藍(lán)染色、IonOptix系統(tǒng)、倒置相差顯微鏡、激光掃描共聚焦熒光顯微鏡(laser scanning confocal microscopy,LSCM)以及fura-2 AM熒光標(biāo)記法等,觀測存活心肌細(xì)胞的存活率以及形態(tài)學(xué)改變,同時動態(tài)監(jiān)測候選細(xì)胞的收縮舒張功能以及細(xì)胞內(nèi)的[Ca2+]cyt濃度變化,前者包括心肌細(xì)胞肌節(jié)靜息長度(sarcomere resting length,SRL)、肌節(jié)收縮長度(sarcomere shortening length,SSL)、收縮速度和舒張速度等指標(biāo),后者包括[Ca2+]cyt濃度基礎(chǔ)值、峰值、鈣敏感性等指標(biāo),從而明確H/R過程中心肌細(xì)胞功能的改變。同時,利用免疫熒光法,測定H/R對存活的大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)總心肌肌鈣蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)及磷酸化cTnI(p-cTnI)的表達(dá)影響,探討心肌細(xì)胞功能改變可能存在的分子生物學(xué)機(jī)制。

參考文獻(xiàn)

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