背景[1-5]
circRNA FISH試劑盒是以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法，具有安全、快速、靈敏度高、探針保存時間長、能同時顯示多種顏色等優(yōu)點。circRNA的亞細胞位置上也呈多樣化，在細胞核、細胞質(zhì)和細胞器均有分布，甚至某些circRNA具有獨特的亞細胞位置，有可能是全新的亞細胞構成。
環(huán)狀RNA（circular RNA）是一類存在于真核生物細胞質(zhì)內(nèi)的特殊的非編碼RNA，具有閉合環(huán)狀結構。在生物體內(nèi)參與了調(diào)控miRNA及其他類型RNA、蛋白質(zhì)活性及功能等。組織特異性：不同組織之間的circRNA表達量不同。時空特異性同一組織或器官的不同生長階段，其中的circRNA表達量也會變化。circRNA的亞細胞位置上也呈多樣化，在細胞核、細胞質(zhì)和細胞器均有分布，甚至某些circRNA具有獨特的亞細胞位置，有可能是全新的亞細胞構成。
circRNA實時定量PCR檢測時高通量篩選后驗證的必選實驗，基于qPCR檢測技術的circRNA表達與差異分析是對測序、芯片結果的有效補充和驗證，是確定研究對象并進行后續(xù)功能研究或分子標志物篩選的基礎。根據(jù)circRNA的閉合環(huán)形結構，針對其接頭序列設計Divergent primers，能有效與線性RNA區(qū)分開來，排除線性RNA干擾。我們專業(yè)的引物設計和PCR反應體系優(yōu)化，可有效保障檢測數(shù)據(jù)的準確性和可靠性，可檢測包括細胞、組織、血液和外泌體等多種樣本中circRNA差異表達情況。
circRNA FISH試劑盒特點：
1、安全、快速、重復性好；
2、特異性100%，靈敏度超過90%；
3、探針性能穩(wěn)定，低溫保存一年以上；
4、熒光信號強，結果判定直觀可靠；
5、操作簡單，定位精準，無實驗污染。
優(yōu)點：
1.準確性：針對circRNA拼接位點，設計跨接頭引物，即便在相應線性RNA存在的情況下也能特異性檢測circRNA，使circRNA的檢測準確可靠；
2.特異性：每一對特異引物都經(jīng)過實驗驗證，熔解曲線都呈單峰，電泳條帶均呈單一條帶，擴增產(chǎn)物大小與目的基因相符；
3.專業(yè)性：每對circRNA引物均由有著多年circRNA研究經(jīng)驗的專業(yè)人員進行設計，并通過實驗嚴格驗證引物的特異性，保證研究結果的可靠性。
4.可定制：“circRNA引物庫”已驗證特異性引物達到20000多對，用戶可自由定制，靈活選擇，大大節(jié)約研究時間。
RIP實驗是基于蛋白研究RNA-蛋白相互作用的技術，該技術是全基因組水平的檢測技術，適合體內(nèi)研究。
實驗流程：
1.細胞裂解
2.捕獲RNA-蛋白復合物
3.洗脫
4.檢測
應用[6]
circRNA FISH試劑盒可用于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和診斷的研究：
circRNA主要通過拮抗miRNA來發(fā)揮“海綿作用”進而調(diào)控靶基因表達,與多種疾病有著密切聯(lián)系,特別是在腫瘤中發(fā)揮重要作用。例如在circRNA在婦科惡性腫瘤中的研究中circRNA可以通過多種調(diào)控方式影響基因表達,例如可負性調(diào)控miRNA表達,也可與蛋白質(zhì)結合調(diào)控基因表達,或可作為相應疾病的診斷標志物或潛在治療靶點。
參考文獻
[1]Cancer incidence and mortality worldwide:Sources,methods and major patterns in GLOBOCAN 2012[J].Jacques Ferlay,Isabelle Soerjomataram,Rajesh Dikshit,Sultan Eser,Colin Mathers,Marise Rebelo,Donald Maxwell Parkin,David Forman,Freddie Bray.Int.J.Cancer.2015(5)
[2]Genome-wide Analysis of Drosophila Circular RNAs Reveals Their Structural and Sequence Properties and Age-Dependent Neural Accumulation[J].Jakub O.Westholm,Pedro Miura,Sara Olson,Sol Shenker,Brian Joseph,Piero Sanfilippo,Susan E.Celniker,Brenton R.Graveley,Eric C.Lai.Cell Reports.2014(5)
[3]The relation between endometriosis and ovarian cancer–a review[J].Lene N.Heidemann,Dorthe Hartwell,Christian H.Heidemann,Kirsten M.Jochumsen.Acta Obstet Gynecol Scand.2014(1)
[4]PABPN 1:molecular function and muscle disease[J].Ayan Banerjee,Luciano H.Apponi,Grace K.Pavlath,Anita H.Corbett.FEBS J.2013(17)
[5]MicroRNA-497 is a potential prognostic marker in human cervical cancer and functions as a tumor suppressor by targeting the insulin-like growth factor 1 receptor[J].Min Luo,Dongxiang Shen,Xiaoning Zhou,Xiaodong Chen,Wei Wang.Surgery.2013(6)
[6]康川川,賴鳳娣,徐玲,鐘佳寧,鐘田雨,謝曉英.circRNA在婦科惡性腫瘤中的研究進展[J].贛南醫(yī)學院學報,2018,38(12):1264-1268.