背景^[1-3]

諾氏梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒是一種專門用于檢測諾氏梭狀芽孢桿菌的體外診斷試劑。它采用了聚合酶鏈式反應（PCR）技術，能夠在短時間內快速、準確地檢測出諾氏梭狀芽孢桿菌。

諾氏梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒的主要成分包括PCR反應液、DNA模板、引物、酶等。其中，PCR反應液是PCR反應的基礎，包含PCR反應所需的各種成分，如緩沖液、離子、酶等。DNA模板是含有諾氏梭狀芽孢桿菌特異性基因序列的DNA片段，用于擴增出特異性片段。引物是一段與DNA模板特異性結合的短序列，用于啟動PCR反應。酶是熱穩(wěn)定的DNA聚合酶，用于催化DNA合成。

使用諾氏梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒時，需要將DNA模板、引物和PCR反應液混合后進行PCR反應。在適宜的溫度和條件下，引物與DNA模板特異性結合，并通過酶的催化進行DNA合成，最終得到大量的特異性DNA片段。通過凝膠電泳等技術對這些片段進行檢測和分析，可以確定是否存在諾氏梭狀芽孢桿菌。

諾氏梭狀芽孢桿菌

諾氏梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒操作流程：

1.整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。

2.為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理。

3.每次實驗應該設置陰、陽性對照。

4.試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。

5.試劑盒內所配陰性和陽性對照在一次使用前應全部轉移至標本準備區(qū)，并單獨存放。

6.為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。

7.儀器擴增相關參數應按照本說明書相關要求進行設置；不同批號試劑不能混用。

8.ABI系列熒光定量PCR儀參數設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。

9.實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。

應用^[4-5]

諾氏梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒可以用于諾氏梭菌孢子聯(lián)合化療治療裸鼠移植肝癌的實驗研究

諾氏梭菌孢子(C.novyi-NT)在體外對人肝癌細胞HuH-7細胞系的毒性作用及對血管內皮生長因子(VEGF)表達的影響

研究在體外厭氧條件下,諾氏梭菌孢子(C.novyi-NT)對體外培養(yǎng)的人肝癌細胞HuH-7細胞系的毒性作用及其對VEGF表達與分泌的影響。

材料與方法：采用諾氏梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒篩選諾氏梭菌菌落收集梭菌孢子；采用細胞培養(yǎng)技術,以人肝癌細胞HuH-7細胞系為靶細胞,將HuH-7細胞隨機分成對照組、梭菌孢子組及阿霉素組,厭氧培養(yǎng)條件下分別加入磷酸鹽緩沖液(PBS液)、諾氏梭菌孢子C.novyi-NT及阿霉素。處理12小時、24小時、48小時及72小時后,應用WST-1比色法測定各不同處理方法對人肝癌細胞HuH-7細胞系的毒性(0D值)。

應用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA法)測定反應24小時、48小時及72小時后對照組及梭菌孢子組細胞培養(yǎng)基上清液中血管內皮生長因子(VEGF)蛋白含量。應用反轉錄聚合酶鏈反應法(RT-PCR法)分析厭氧培養(yǎng)72小時后對照組及梭菌孢子組HuH-7細胞的VEGF mRNA表達水平。

結果：將梭菌孢子C.novyi-NT加入體外培養(yǎng)的人肝癌細胞HuH-7細胞后顯示出毒性作用和對該細胞系的生長抑制效應。加入梭菌孢子C.novyi-NT作用12小時后,細胞生長開始出現(xiàn)停滯,細胞呈圓形或球形,胞漿中出現(xiàn)顆粒狀物質。72小時后,細胞培養(yǎng)基中出現(xiàn)更多細胞碎片。

厭氧培養(yǎng)條件下,細胞損傷隨時間的延長逐漸加劇。24小時后,梭菌孢子C.novyi-NT的細胞毒性作用明顯強于對照組,兩組0D值具有顯著差異,與阿霉素組相比無明顯差異。24、48、72小時細胞上清液中VEGF的量,梭菌孢子組與對照組相比無明顯統(tǒng)計學差異；但72小時后,梭菌孢子組厭氧培養(yǎng)的細胞VEGF mRNA表達水平明顯高于對照組(p=0.012)。

結論：在厭氧培養(yǎng)條件下諾氏梭菌孢子(C.novyi-NT)對體外培養(yǎng)的人肝癌細胞HuH-7細胞系有明顯的細胞毒性作用,且影響VEGF的mRNA表達。

參考文獻

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[3]IL-18-producing Salmonella inhibit tumor growth..Loeffler M;;Le'Negrate G;;Krajewska M;;Reed J C.Cancer gene therapy,2008

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