背景^[1-7]

蛋白質質譜鑒定服務是檢測蛋白質分子量、蛋白質的修飾、也可經(jīng)過酶解消化后，經(jīng)二級質譜鑒定蛋白質種類的鑒定服務。蛋白質（protein）是有機大分子，是構成細胞的基本有機物和生命活動的主要承擔者。蛋白質在催化生命體內各種反應進行、新陳代謝、抵御外來物質入侵及控制遺傳信息等方面都起著至關重要的作用。蛋白質的一級結構是氨基酸序列，通過鑒定氨基酸序列來匹配它的蛋白質，這是定性研究，是蛋白質組學的基礎，也是蛋白質組學的核心技術之一。質譜一般由離子源（Ion source）、質量分析器（Mass analyzer）和離子檢測器（Detector）三部分組成。

傳統(tǒng)的質譜僅用于小分子揮發(fā)物質的分析，但隨著新的離子化技術的出現(xiàn)，如基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(MALDI-TOF)和電噴霧電離質譜(ESI-MS)等，各種質譜技術的出現(xiàn)為蛋白質分析提供了一種新的且準確快速的途徑。現(xiàn)在蛋白質組學基本研究手段是：以生物質譜技術為核心，對蛋白質進行大規(guī)模、高通量分離、鑒定和分析。

蛋白質質譜鑒定的基本原理是用蛋白酶將蛋白質消化成肽段混合物，經(jīng)MAILDI或ESI等軟電離手段將其離子化，然后通過質量分析器將具有特定質核比的肽段離子分離開來。通過實際譜圖和理論上蛋白質經(jīng)過蛋白酶消化后產(chǎn)生的一級質譜峰圖和二級質譜峰圖進行的比對，進行蛋白鑒定。

雖然目前有多種蛋白質分離純化的方法，但在很多時候分離效率不夠高，導致分離后的蛋白可能還是含有多個蛋白。另外，對于豐度較低的蛋白質可能在分離過程中造成進一步損失而無法被鑒定到，因此需要直接對這一類蛋白質不經(jīng)過分離處理直接進行分析。

目前適用于對混合蛋白進行分析的方法有LC-MS/MS色譜質譜串聯(lián)分析法。與PMF法和MS/MS法相比，LC-MS/MS在質譜分析前加了液相色譜的分離，使得蛋白分析精度更高，對肽段序列測定幾乎可以的達到100％的準確度。因此，與單個蛋白質膠帶的鑒定相比，這項服務的可以鑒定的蛋白數(shù)量也更多。LC-MS/MS可以用于鑒定200個蛋白質左右的蛋白混合物樣品，包括免疫沉淀樣品，Pull-down樣品等。

對比

蛋白質譜MALDI-TOF/TOF法和LC-MS/MS法區(qū)別：

1、與LC／MS／MS相比，MALDI-TOF的識別結果不可靠，特別是當一個點中含有多個蛋白時。對于一個點的水解蛋白液來說，其中含有大量的多肽，并且經(jīng)常含有修飾基團。一般來說，一個蛋白能水解出20～50種肽。用MALDI-TOF質譜測量多肽混合物時，待測組分不能完全離子化，對于一個蛋白得不到足夠的肽信息，無法搜索肽數(shù)據(jù)庫進行蛋白的識別。而LC-MS-MS聯(lián)用能夠檢測到相當高的肽段數(shù)量和氨基酸序列，這樣進行蛋白質識別就有了較高的可信度。

2、MALDI-TOF也不能進行翻譯后修飾蛋白質的分析。具有離子阱的LC-MS-MS技術能夠通過解析修飾導致的肽譜質量漂移提供修飾信息，并且能夠提供修飾類型和修飾位點的結構信息。

服務類型^[8]

1.蛋白質表達譜和混合蛋白質的鑒定

2.相互作用蛋白質的鑒定

3.稀有物種的蛋白質組鑒定

參考文獻

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