背景^[1]

作為一種新型納米材料，磁珠能用于檢測毒素、病毒、細菌等，也可用于分離特定生物分子。磁性分離技術是以磁性微粒為載體，在外加磁場的定向控制下，利用磁性微粒表面的配體和受體間的特異性親和作用，可從復雜的原始生物體系中直接分離出目標生物分子，具有簡單方便和高選擇性的雙重優(yōu)勢，為生物分子的快速分離和富集提供一種強有力的手段。

制備^[2]

參考 Liu 等的 NHS/EDC 化學偶聯方法，將 Tm 的單克隆抗體 2A7H6與磁珠化學偶聯。

首先，分別取 A 和 B 兩種磁珠 1 mg，用 50 mM MEST 溶液（含 0.05% Tween-20，pH 5.2）洗滌 3 次，分別加入 1.6 μg 的 EDC 和 NHS，混合均勻后室溫反應 30 min。

然后用 MEST 洗滌磁珠 3 次，再用 10 m M 硼酸鹽緩沖液（簡稱 BST，含 0.05% Tween-20，pH 9.0）洗滌 2 次，分別加入 25、50、75、100和 125 μg 的 2A7H6抗體，室溫混合反應 3 h。反應結束后收集上清液用于偶聯量測定。用 BST 洗滌3 次后，加入 500 μL 封閉液（含 1% BSA 的 BST 溶液），室溫反應 30 min。

最后，將免疫磁珠重懸在 500 μL 保存液（含 0.05% NaN3和 0.1% BSA 的 BST 溶液）中，4 ℃冷藏備用。

Mag-Beads His-Tag蛋白純化磁珠

首先，取制備好的免疫磁珠，用 500 μL 20 mM PBS 溶液（pH 7.2）洗滌 3 次后，加入 1 mg Tm富集液反應 30 min，然后回收上清液用于蛋白定量。接著用 500 μL PBS 洗滌磁珠 2 次，加入 500 μL 20 mM 甘氨酸-HCl 緩沖液（pH 2.7）于垂直混合器上反應，洗脫 15 min。在收集洗脫液的離心管中提前加入適量的 Tris-HCl 緩沖液（pH 9.0），使洗脫液 pH 保持中性。洗脫后的免疫磁珠用 MEST 緩沖液洗滌 4 次后重懸在 500 μL 保存液中，4 ℃冷藏保存。

參考文獻

[1] 不同磁珠對過敏原蛋白純化效果的比較研究 .李文嬌

[2] Liu  Y,  Zhang  Z,  Wang  Y,  et  al.  A  highly  sensitive  and  flexible  magnetic  nanoprobe  labeled  immunochromatographic  assay

  platform for pathogen Vibrio parahaemolyticus[J].