簡介

1，2-二油酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺多用作脂質(zhì)體的載體，其具有無毒性和與DNA的復(fù)合物在血清中的高穩(wěn)定性，迄今為止備受關(guān)注。例如：將1，2-二醇酰基-sn-甘氨酸-3-磷酸乙醇酰胺-N-十二烷胺（12PE）與DOPC的混合物以自組裝的方式，再與金屬陽離子形成配合物，進(jìn)一步促進(jìn)DNA縮合[1]。

圖1 1，2-二油酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺。

合成

圖2 1，2-二油酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺的合成路線[2]。

在5ml無水氯仿/甲醇/三乙胺溶劑混合物（4.5:0.5:0.05 v/v）中，用20倍摩爾過量的NHS/EDC（1:1摩爾比）活化6毫克MAL-PEG（3000）-MMP2-COH過夜。在4°C氮氣保護(hù)下，使活化的MAL-PEG（3000）-MMP2-NHS與10倍摩爾過量的DOPE反應(yīng)2小時。使用氯仿/甲醇（4:1 v/v）作為流動相，在制備型鋁TLC板（硅膠60 F254，20 x 20 cm，Merck）上純化反應(yīng)。純化冷凍干燥的殘留物，并在?20°C下儲存，以獲得產(chǎn)品1，2-二油酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺。合成路線如圖2所示。

圖3 1，2-二油酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺的合成路線[3]。

向1-油?；?2-羥基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺（4μmol）和2-（油?；蚧?N，N，N-三甲基乙烷-1-胺氯化物（6μmol）的混合物中加入pH=10.6的Na2CO3/NaHCO3緩沖液（8 mL）將反應(yīng)在37°C下進(jìn)行5小時，以獲得產(chǎn)品1，2-二油酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺。合成路線如圖3所示。

圖4 1，2-二油酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺的合成路線。

將1毫克可裂解MMP2肽（NH2-Gly-Pro-Leu-Gly-Ile-Ala-Gly-Gln-COOH）和6.25毫克MAL-PEG（3000）-NHS（O-[N-（6-馬來酰亞胺基己?；┌被一鵠-O’-[3-（N-琥珀酰亞胺基氧基）-3-氧代丙基]聚乙二醇3000）（1:1.5摩爾比）在1毫升碳酸鹽緩沖液（1 mM，pH 8.5）中混合。將混合物在4°C下攪拌過夜。在透析管上用10體積0.1mM碳酸鹽緩沖液在4°C下純化綴合肽24小時，然后通過配備紫外檢測器和C18柱（Agilent，十八烷基，5μm粒徑，L×I.D.25 cm×4.6 mM）的高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行純度確認(rèn)。在環(huán)境溫度下以1ml/min的流速分析適用于梯度洗脫條件。加入流動相A為含0.1%TFA的乙腈，流動相B為0.1%TFA水溶液。在溶液A的5%開始洗脫混合物，并在30分鐘內(nèi)以溶液A的100%結(jié)束。將檢測器波長和注射體積分別設(shè)置為220 nm和20μl。純化冷凍干燥的殘留物，并在?20°C下儲存，以獲得產(chǎn)品1，2-二油酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺。合成路線如圖4所示。

參考文獻(xiàn)

[1] M. Pisani, G. Mobbili, I.F. Placentino, A. Smorlesi, P. Bruni, Biophysical Characterization of Complexes of DNA with Mixtures of the Neutral Lipids 1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-hexanoylamine or 1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-dodecanoylamine and 1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine in the Presence of Bivalent Metal Cations for DNA Transfection, JOURNAL OF PHYSICAL CHEMISTRY B 115(34) (2011) 10198-10206.

[2] Gholamian Dehkordi, Neda; et al. Intelligent TAT-coupled anti-HER2 immunoliposomes knock downed MDR1 to produce chemosensitize phenotype of multidrug resistant carcinoma. Journal of Cellular Physiology (2019), 234(11), 20769-20778.

[3] Liu, Luping; et al. Enzyme-free synthesis of natural phospholipids in water. Nature Chemistry (2020), 12(11), 1029-1034.