背景[1-3]
VERO C1008(E6)非洲綠猴腎細(xì)胞是VERO 76的克隆細(xì)胞株,而VERO 76是初始VERO細(xì)胞株的一個(gè)衍生株。Vero細(xì)胞系是從非洲綠猴的腎臟上皮細(xì)胞中分離培養(yǎng)出來(lái)的。這個(gè)細(xì)胞系由日本千葉大學(xué)的Yasumura和Kawakita于1962年3月27日擴(kuò)增出來(lái)。該細(xì)胞系取“Verda Reno”（世界語(yǔ)意為‘綠色的腎臟’）的簡(jiǎn)寫而命名為"Vero"，而"Vero"本身在世界語(yǔ)中也有“真相”的意思。
Vero細(xì)胞系是連續(xù)的非整倍體細(xì)胞。連續(xù)細(xì)胞系可以經(jīng)過(guò)許多分裂周期而不衰老。非整倍體是指細(xì)胞中的染色體數(shù)目與通常的不同。
VERO C1008(E6)非洲綠猴腎細(xì)胞
Vero細(xì)胞有干擾素分泌缺陷的特點(diǎn)；與其它普通哺乳動(dòng)物細(xì)胞不同，當(dāng)被病毒感染時(shí)，它不能分泌干擾素，但它仍然具有α/β-干擾素的受體，所以對(duì)于其它來(lái)源的干擾素仍有正常的反應(yīng)。
Vero細(xì)胞用途廣泛：
1.vero細(xì)胞用于檢查大腸桿菌毒素。大腸桿菌毒素最初就因此細(xì)胞系而被命名為Vero毒素，后來(lái)被稱為志賀菌素樣毒素，因?yàn)樗c在痢疾志賀菌中分離出來(lái)的志賀菌素很相似。
2.作為培養(yǎng)病毒的細(xì)胞宿主。比如：測(cè)定某種藥物對(duì)病毒復(fù)制速度的影響，檢驗(yàn)是否存在狂犬病毒或者為了研究目的培養(yǎng)病毒。
3.作為真核寄生蟲(chóng)的宿主細(xì)胞，尤其是錐體蟲(chóng)屬。
4.用于疫苗生產(chǎn)中的病毒培養(yǎng)基質(zhì)細(xì)胞，是在限定代次內(nèi)不致癌的異倍體細(xì)胞，WHO批準(zhǔn)可以用于人類疫苗的生產(chǎn)基質(zhì)。
應(yīng)用[4][5]
用于抗PEDV單克隆抗體的制備及雙抗體夾心ELISA方法的建立研究
PED為高度接觸性腸道傳染病,感染仔豬表現(xiàn)為發(fā)熱、嘔吐、脫水、嚴(yán)重腹瀉等癥狀。PEDV具有4種結(jié)構(gòu)蛋白,分別為纖突蛋白、膜糖蛋白、小膜蛋白和核衣殼（Nucleocapsid,N）蛋白。其中N蛋白是一個(gè)重要的結(jié)構(gòu)蛋白,并且高度保守,常作為檢測(cè)PEDV的目的蛋白。
通過(guò)Vero C1008細(xì)胞繁殖本實(shí)驗(yàn)室內(nèi)保存的PEDV CV777細(xì)胞適應(yīng)株,隨后通過(guò)梯度密度離心得到純化PEDV,經(jīng)SDS-PAGE和Western blot分析,PEDV純化效果良好。將純化后的PEDV免疫BALB/c小鼠,通過(guò)雜交瘤細(xì)胞制備技術(shù)獲得3株穩(wěn)定分泌抗N蛋白抗體的雜交瘤細(xì)胞,分別命名13C3A10-2、6G8和12E2H8-2。間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,3株單克隆抗體均能與PEDV疫苗毒CV777及野生毒株產(chǎn)生特異性的熒光信號(hào)。
Western blot實(shí)驗(yàn)表明,3種單克隆抗體均能與病毒N蛋白和重組表達(dá)的N蛋白發(fā)生反應(yīng)。應(yīng)用效價(jià)最高的單克隆抗體13C3A10-2作為捕獲抗體,PEDV陽(yáng)性多克隆血清內(nèi)抗體作為結(jié)合抗體,初步建立了雙抗體夾心ELISA方法用于檢測(cè)病料中的PEDV。
繼而,對(duì)于建立的ELISA方法進(jìn)行了特異性、敏感性、穩(wěn)定性的檢測(cè),應(yīng)用本方法初步檢測(cè)了65份病料,并與RT-PCR檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了符合率的比較。結(jié)果表明,符合率為94.7%,可以初步應(yīng)用于PEDV的檢測(cè)。
參考文獻(xiàn)
[1]Swine enteric coronavirus disease:A review of 4 years with porcine epidemic diarrhoea virus and porcine deltacoronavirus in the United States and Canada[J].M.C.Niederwerder,R.A.Hesse.Transboundary and Emerging Diseases.2018(3)
[2]Real-time reverse transcription recombinase polymerase amplification assay for rapid detection of porcine epidemic diarrhea virus[J].Jianchang Wang,Ruoxi Zhang,Jinfeng Wang,Qingan Han,Libing Liu,Yanan Li,Wanzhe Yuan.Journal of Virological Methods.2018
[3]Investigation of three outbreaks of Porcine Epidemic Diarrhea in Germany in 2016 demonstrates age dependent differences in the development of humoral immune response[J].Julia Stadler,Lisa Moser,Jasmin Numberger,Anna Rieger,Katrin Strutzberg-Minder,Thorsten Stellberger,Andrea Ladinig,Mathias Ritzmann,Robert Fux.Preventive Veterinary Medicine.2018
[4]Tissue localization,shedding,virus carriage,antibody response,and aerosol transmission of Porcine epidemic diarrhea virus following inoculation of 4-week-old feeder pigs[J].Megan C.Niederwerder,Jerome C.Nietfeld,Jianfa Bai,Lalitha Peddireddi,Barbara Breazeale,Joe Anderson,Maureen A.Kerrigan,Baoyan An,Richard D.Oberst,Kimberly Crawford,Kelly M.Lager,Darin M.Madson,Raymond R.R.Rowland,Gary A.Anderson,Richard A.Hesse.Journal of Veterinary Diagnostic Investigation.2016(6)
[5]王睿.抗PEDV單克隆抗體的制備及雙抗體夾心ELISA方法的建立[D].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2018.