背景[1-3]
COC1細(xì)胞是人卵巢癌懸浮細(xì)胞系，該細(xì)胞建系于1993年。細(xì)胞于原代培養(yǎng)至第17天首次傳代，以后反復(fù)傳代，生物學(xué)特性穩(wěn)定。可表達(dá)多種腫瘤標(biāo)志物和野生型P53蛋白、突變型P53蛋白。裸鼠接種產(chǎn)生分化差的腺癌。
COC1細(xì)胞
卵巢癌是卵巢腫瘤的一種惡性腫瘤，是指生長(zhǎng)在卵巢上的惡性腫瘤，其中90%～95%為卵巢原發(fā)性的癌，另外5%～10%為其它部位原發(fā)的癌轉(zhuǎn)移到卵巢。由于卵巢癌早期缺少癥狀，即使有癥狀也不特異，篩查的作用又有限，因此早期診斷比較困難，就診時(shí)60%～70%已為晚期，而晚期病例又療效不佳。
培養(yǎng)步驟：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
應(yīng)用[4][5]
用于雙氯芬酸對(duì)卵巢癌鉑類(lèi)耐藥細(xì)胞COC1/DDP化療敏感性的影響研究
用MTT檢測(cè)藥物對(duì)卵巢癌鉑類(lèi)耐藥細(xì)胞COC1/DDP的增殖抑制作用；應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)藥物作用后卵巢癌鉑類(lèi)耐藥細(xì)胞COC1/DDP的凋亡率；應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞COC1和卵巢癌鉑類(lèi)耐藥細(xì)胞COC1/DDP細(xì)胞中E2F1的表達(dá)情況。
方法：應(yīng)用MTT和流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)雙氯芬酸單藥、順鉑單藥及順鉑聯(lián)合雙氯芬酸作用后卵巢癌鉑類(lèi)耐藥細(xì)胞COC1/DDP的生長(zhǎng)抑制率及其對(duì)順鉑的半數(shù)抑菌濃度（IC50）和細(xì)胞凋亡率；應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞COC1及卵巢癌鉑類(lèi)耐藥細(xì)胞COC1/DDP中E2F1表達(dá)情況，檢測(cè)不同濃度的雙氯芬酸作用48h后及濃度為50mol/L的雙氯芬酸作用72h后卵巢癌鉑類(lèi)耐藥細(xì)胞COC1/DDP中E2F1表達(dá)情況。
統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)和分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。以a=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
結(jié)果1、雙氯芬酸單藥作用48h后卵巢癌鉑類(lèi)耐藥細(xì)胞COC1/DDP的生長(zhǎng)抑制率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，進(jìn)一步兩兩比較，藥物濃度10mol/L、30mol/L、50mol/L三組兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），藥物濃度70mol/L、90mol/L與以上三組兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
2、順鉑單藥作用48h后卵巢癌鉑類(lèi)耐藥細(xì)胞COC1/DDP對(duì)順鉑的IC50=8.39g/ml，順鉑聯(lián)合雙氯芬酸作用48h后卵巢癌鉑類(lèi)耐藥細(xì)胞COC1/DDP對(duì)順鉑的IC50=4.35g/ml，兩者抑制率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
3、濃度為50mol/L的雙氯芬酸單藥作用48h后卵巢癌鉑類(lèi)耐藥細(xì)胞COC1/DDP細(xì)胞凋亡率=（2.850.37）%，濃度為4g/ml的順鉑單藥作用48h后卵巢癌鉑類(lèi)耐藥細(xì)胞COC1/DDP細(xì)胞凋亡率=（12.740.45）%，順鉑聯(lián)合雙氯芬酸作用48h后卵巢癌鉑類(lèi)耐藥細(xì)胞COC1/DDP細(xì)胞凋亡率=（23.780.49）%，凋亡率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
參考文獻(xiàn)
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[5]楊香麗.雙氯芬酸對(duì)卵巢癌鉑類(lèi)耐藥細(xì)胞COC1/DDP化療敏感性的影響[D].鄭州大學(xué),2014.