背景^[1-3]

WESTERN抗體洗脫液(強(qiáng)堿性)亦稱為蛋白印跡膜再生液Stripping buffer或Western一抗二抗去除液，用于Western中轉(zhuǎn)移了蛋白的膜的重復(fù)利用，含有氫氧化鈉。

在Western中完成了一抗二抗結(jié)合和后續(xù)的化學(xué)發(fā)光檢測后，有時(shí)還需要檢測GAPDH、β-actin等表達(dá)量相對穩(wěn)定的管家蛋白或其它蛋白作為參照。Stripping buffer可以洗脫一抗二抗，非常方便地重新利用使用過的膜，檢測其它蛋白。Stripping buffer多次重復(fù)使用同一張膜，會(huì)導(dǎo)致蛋白信號(hào)的減弱不宜重復(fù)利用膜，一般可以利用2～3次。

Western Blot檢測流程

WESTERN抗體洗脫液(強(qiáng)堿性適用于使用ECL類似的化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行的Western檢測，用WESTERN抗體洗脫液(強(qiáng)堿性)只需大約15-20分鐘即可實(shí)現(xiàn)蛋白膜的重復(fù)使用，然后可以進(jìn)行封閉等后續(xù)的Western操作。

蛋白質(zhì)印跡法（免疫印跡試驗(yàn)）即Western Blot。它是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。

應(yīng)用^[4][5]

用于定量PCR和Western blot結(jié)合檢測轉(zhuǎn)基因大豆植物組織和商業(yè)化大豆相關(guān)食品中CP4-EPSPS成分研究

采用CTAB試劑,對Biozol抽提法進(jìn)行改良提取植物組織中的DNA、RNA和蛋白質(zhì)；進(jìn)而結(jié)合了定量PCR和Western blot來檢測轉(zhuǎn)基因大豆不同組織和不同大豆商業(yè)化食品中CP4-EPSPS基因和蛋白的表達(dá)。

研究證明改良的Biozol一步法從玉米、大豆、苜蓿和黃瓜組織中不僅能一步提取得到相應(yīng)的RNA和蛋白質(zhì),DNA也有明顯的條帶。

其中,獲得的RNA和DNA樣品經(jīng)紫外分光光度計(jì)測定和瓊脂糖凝膠電泳分析證明純度較高,血紅素加氧酶（heme oxygenase,HO）基因HO-1和鈣依賴蛋白激酶（calcium-dependent protein kinase,CDRK）基因CDRK1的RT-PCR結(jié)果呈陽性,所提取的蛋白質(zhì)也可以用于Western blot分析,且整個(gè)提取過程只需3h；與分別提取RNA、DNA和蛋白質(zhì)的方法相比,本一步法可同時(shí)分離單個(gè)樣品中的三種產(chǎn)品,避免了樣品間的誤差,而且提取所得的產(chǎn)物純度較高,為進(jìn)一步的研究提供了便利。

進(jìn)而利用基因水平和蛋白水平兩種方法檢測不同大豆商業(yè)化食品中CP4-EPSPS基因和蛋白的表達(dá)。所檢食物制品包括轉(zhuǎn)基因植物源食品和同時(shí)含有大豆蛋白和肉品的食品。

在驗(yàn)證兩種方法的可用性之后,研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在部分所檢食物中至少有兩條蛋白降解條帶被檢測到（35.5和24.6kD）。在豆腐皮和豆干樣品中,檢測到了一條蛋白降解條帶（24.6kD）,而定量PCR未能在這些樣品中檢測到CP4-EPSPS基因；相反的,在標(biāo)注含有大豆蛋白的火腿切片、肉丸和香腸樣品中檢測到了CP4-EPSPS基因的成分而Western blot卻未能檢測到蛋白的降解。

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