背景^[1-3]

胎牛血清(GIBCO原裝,產(chǎn)地澳洲)是Gibco原裝進(jìn)口產(chǎn)品，產(chǎn)地澳洲。胎牛血清為純天然制品，不含任何人為的添加成分，可應(yīng)用于各種常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)，特別適合于一些要求較高的細(xì)胞的培養(yǎng)，為細(xì)胞提供必須的營養(yǎng)物質(zhì)和多種生長因子，有效促進(jìn)細(xì)胞生長。

Gibco是世界著名動(dòng)物血清品牌，所有血源都是由美國農(nóng)業(yè)部和歐盟所認(rèn)證的無瘋牛病區(qū)域的屠宰場所提供。

胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。

顯然，胎牛血清是品質(zhì)最高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分最少。

血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。

胎牛血清從血液收集到最終產(chǎn)品檢驗(yàn)和審核的每一個(gè)步驟，都采用專用設(shè)備和標(biāo)準(zhǔn)操作程序，保證高品質(zhì)和各批次的一致性。所有操作符合GMP(Good Manufacturing Practices for Drug)標(biāo)準(zhǔn)。無細(xì)菌、真菌、支原體及病毒污染，具有高質(zhì)量和高穩(wěn)定性。

應(yīng)用^[4][5]

用于不同濃度胎牛血清培養(yǎng)下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)為心肌樣細(xì)胞的比較研究

研究不同濃度胎牛血清培養(yǎng)下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的一般特性如形態(tài)、核型、增殖動(dòng)力學(xué)、表型特點(diǎn)和分化成心肌樣細(xì)胞潛能等生物學(xué)性狀,并在低血清濃度下培養(yǎng)誘導(dǎo)后的心肌樣細(xì)胞,并觀察心肌樣細(xì)胞增殖和特異性蛋白的表達(dá)情況。

方法:采用全骨髓貼壁的培養(yǎng)方法獲取大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）。在細(xì)胞傳到第2代時(shí),分為5個(gè)組,加入含有不同濃度胎牛血清（FBS）的L-DMEM培養(yǎng)基,FBS濃度分別為0%,2.5%,5%,7.5%,10%,并以濃度系數(shù)標(biāo)記各組。

取第4代BMSCs,利用MTT法在（1、3、5、7、9d）檢測細(xì)胞的增殖。分別取各組傳代到第4代BMCS,加入Ang II和5-Aza（Ang II 0.1μmol/l和5-Aza 10μmol/l）誘導(dǎo)劑誘導(dǎo),24h后吸棄含有誘導(dǎo)劑的培養(yǎng)液,跟換新培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

取誘導(dǎo)后各組的第1代（y P1）細(xì)胞,使用MTT法檢測類心肌細(xì)胞在（1、3、5、7d）的生長活力,細(xì)胞免疫熒光化學(xué)染色法檢測誘導(dǎo)后培養(yǎng)至第4周時(shí)各組中c Tn I,Cx-43兩類心肌相關(guān)蛋白的表達(dá)情況,并計(jì)算其表達(dá)率。

結(jié)果:1.在5種不同濃度FBS下的L-DMEM培養(yǎng)液均可獲得第4代BMSCs;MTT檢測細(xì)胞活力（1、3、5、7、9d）結(jié)果顯示,5組不同體積分?jǐn)?shù)的FBS培養(yǎng)液均可以促進(jìn)BMSCs的生長,10%組>2.5%,5%,7.5%組>0%組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）,2.5%,5%,7.5%組組間比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。

2.各組BMSCs在AngⅡ和5-Aza（AngⅡ0.1μmol/L、5-Aza 10μmol/L）聯(lián)合作用誘導(dǎo)時(shí),能分化為類心肌樣細(xì)胞。誘導(dǎo)后的細(xì)胞MTT檢測細(xì)胞活力顯示10%組>7.5%>5%,2.5%組>0%組（p<0.05）,而5%,2.5%組比較未見明顯差異（p>0.05）。各組心肌樣細(xì)胞的蛋白的表達(dá)顯示10%組>7.5%>5%,2.5%組>0%組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）,而5%,2.5%組比較未見明顯差異,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。

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