介紹^[1]

細(xì)胞永生化是當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)研究熱點(diǎn)之一,所謂永生化是細(xì)胞生物學(xué)術(shù)語,指動(dòng)物細(xì)胞因脫分化失敗,受到病毒感染、外源惡意代碼轉(zhuǎn)染、輻射或藥劑作用后,細(xì)胞分裂次數(shù)限制機(jī)制和DNA檢查自毀機(jī)制失靈,導(dǎo)致具有無限分裂生長(zhǎng)能力的過程。而細(xì)胞永生化則是指細(xì)胞獲得持續(xù)生長(zhǎng)增殖能力的特性,永生化的細(xì)胞具有無限增殖生長(zhǎng)性，可長(zhǎng)期傳代，并多伴有核型改變,細(xì)胞永生化是癌變的必經(jīng)途徑。由于正常組織來源的原代細(xì)胞在通常的體外培養(yǎng)條件下雖可生長(zhǎng)和分裂,但經(jīng)過有限次的細(xì)胞傳代后，就會(huì)停止增殖,發(fā)生衰老和死亡，限制了細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的進(jìn)一步應(yīng)用,因此有學(xué)者通過基因轉(zhuǎn)染等技術(shù)將外源性永生化基因?qū)四康募?xì)胞內(nèi)，如病毒、原癌基因和抑癌基因突變體等,以增加永生化的發(fā)生率,進(jìn)而建立永生化細(xì)胞株(immortalized cellstrains)以達(dá)到使體外培養(yǎng)的細(xì)胞具有無限增殖能力,實(shí)現(xiàn)細(xì)胞間無差異的目的。

由于商品化的傳代細(xì)胞系功能和形態(tài)均已發(fā)生變化,與體內(nèi)相應(yīng)部位的細(xì)胞相比不能真實(shí)模擬體內(nèi)細(xì)胞分化的細(xì)胞類型,而原代細(xì)胞發(fā)育和分化能夠更好地模擬病毒感染動(dòng)物的體內(nèi)微環(huán)境,永生化細(xì)胞的表型及功能特性與原代細(xì)胞相較甚遠(yuǎn)，因此原代細(xì)胞成為構(gòu)建平臺(tái)細(xì)胞的首選。

方法^[1]

1、端粒酶轉(zhuǎn)染法：端粒酶活化是各種細(xì)胞永生化方法的共同步驟,通過表達(dá)端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶( human telomerase re-verse transcriptase, hTERT)可以激活端粒酶活性,維持端粒長(zhǎng)度,阻止染色體端粒降解,誘導(dǎo)上皮細(xì)胞永生化。端粒酶轉(zhuǎn)染建立的永生化細(xì)胞可保持正常細(xì)胞的生理特性。

2、回復(fù)性永生：將已經(jīng)得到成熟、廣泛應(yīng)用的條件基因敲除技術(shù)( conditional gene knockout )-Cre/LoxP系統(tǒng),聯(lián)合轉(zhuǎn)基因技術(shù)誘導(dǎo)細(xì)胞永生化，又稱可回復(fù)性永生化技術(shù)( reversible immortaliza-tion)。

主要參考文獻(xiàn)

[1]吳萌，殷建忠，朱武洋；原代細(xì)胞永生化的研究進(jìn)展。《國際病毒學(xué)雜志》