簡介^[1]

細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)是用來檢測細(xì)胞增殖能力、侵襲性、對殺傷因素敏感性等的重要技術(shù)方法。實(shí)驗(yàn)方法包括平板克隆形成實(shí)驗(yàn)和軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)。由于細(xì)胞生物學(xué)性狀不同，細(xì)胞克隆形成率差別也很大，正常細(xì)胞克隆形成率弱，腫瘤細(xì)胞強(qiáng)；初代培養(yǎng)細(xì)胞克隆形成率弱，傳代細(xì)胞系強(qiáng)；二倍體細(xì)胞克隆形成率弱，轉(zhuǎn)化細(xì)胞系強(qiáng)。由于克隆形成率與接種密度有一定關(guān)系，做克隆形成率測定時(shí)，接種細(xì)胞一定要分散成單細(xì)胞懸液，隨時(shí)檢查，到細(xì)胞形成克隆時(shí)終止培養(yǎng)。當(dāng)單個(gè)細(xì)胞在體外增殖6代以上，其后代所組成的細(xì)胞群體，成為集落或克隆。每個(gè)克隆含有50以上的細(xì)胞，大小在 0.3-1.0 mm之間。集落形成率表示細(xì)胞的獨(dú)立生存能力。各種理化因素可能導(dǎo)致細(xì)胞的克隆形成能力發(fā)生改變。通過一定的實(shí)驗(yàn)方法可以對細(xì)胞的克隆形成能力進(jìn)行檢測，細(xì)胞克隆形成率即細(xì)胞接種存活率，表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞成活并形成克隆的數(shù)量。貼壁后的細(xì)胞不一定每個(gè)都能增殖和形成克隆，而形成克隆的細(xì)胞必為貼壁和有增殖活力的細(xì)胞。克隆形成率反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個(gè)重要性狀。

實(shí)驗(yàn)流程^[1]

A．平板克隆形成實(shí)驗(yàn)：適用于貼壁生長的細(xì)胞。

1. 取對數(shù)生長期的各組細(xì)胞，制備細(xì)胞懸液。

2. 將細(xì)胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋，分別接種含培養(yǎng)液的皿中，培養(yǎng)2-3周。

3. 經(jīng)常觀察，當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時(shí)，終止培養(yǎng)。

4. 棄去上清液，4%多聚甲醛固定，GIMSA染色液染10-30 min。

5. 計(jì)算克隆形成率，克隆形成率 =（克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)）× 100%。

6. 結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析。

B．軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)：適用于非錨著依賴性生長的細(xì)胞。

1. 制備細(xì)胞懸液，梯度倍數(shù)稀釋。

2. 分別制備1.2%和0.7%瓊脂糖溶液。

3. 下層瓊脂凝固后放入37℃培養(yǎng)箱備用。

4. 加入細(xì)胞懸液，待上層瓊脂凝固后，培養(yǎng)10-14天。

5. 計(jì)算克隆形成率，克隆形成率 =（克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)）× 100%。

6. 結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析。

服務(wù)說明^[1]

1. 客戶提供：細(xì)胞株，所需藥品，藥物處理方式和濃度。

2. 公司提供：原始數(shù)據(jù)及分析結(jié)果、完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

3. 實(shí)驗(yàn)周期：20-40個(gè)工作日，具體需要根據(jù)細(xì)胞生長情況及實(shí)驗(yàn)內(nèi)容而定。

主要參考文獻(xiàn)

[1] 李佩文；微流控芯片單細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)用于乳腺癌干細(xì)胞靶向藥物篩選。廣州醫(yī)科大學(xué)。