背景[1-3]
生物素標(biāo)記的人IGG是經(jīng)親和層析純化成高純度IgG成分，將活化生物素（羥基琥珀酰亞胺酯，BNHS）共價交聯(lián)到抗體IgG分子上制成。生物素化人IgG標(biāo)記的樣品可應(yīng)用酶標(biāo)或熒光染料標(biāo)記的親和素或生物素-親和素復(fù)合物來檢測。生物素又稱維生素H、輔酶R，是水溶性維生素，也屬于維生素B族，B7。它是合成維生素C的必要物質(zhì)，是脂肪和蛋白質(zhì)正常代謝不可或缺的物質(zhì),是一種維持人體自然生長、發(fā)育和正常人體機(jī)能健康必要的營養(yǎng)素。
生物素可以用作核酸探針的標(biāo)記物，它能與核酸分子的UTP或dUTP 5‘位上的C相結(jié)合，并可與親和素結(jié)合而被檢測。在檢測的過程中，生物素只用作固定連接，而不用作信號檢測?？贵w的產(chǎn)生是對外來分子侵入體內(nèi)的一種響應(yīng)。抗體以一個或多個由四條多肽鏈組成的Y形單體存在。每個Y形單體包含兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈，重鏈和輕鏈的序列和長度不同。Y形單體的頂部包含可變區(qū)，該區(qū)可與抗原上的表位特異性緊密結(jié)合。
IgG是免疫球蛋白G(Immunoglobulin G，IgG)的縮寫，是血清主要的抗體成分，約占血清Ig的75%。其中40～50%分布于血清中，其余分布在組織中。IgG是唯一可以通過胎盤的免疫球蛋白。IgG的功能作用主要在機(jī)體免疫中起保護(hù)作用，大多數(shù)抗菌、抗病毒；應(yīng)對麻疹、甲型肝炎等，能有效地預(yù)防相應(yīng)的感染性疾病。其指標(biāo)對于診斷某些疾病具有意義。
應(yīng)用[4][5]
用于基于生物素—親和素系統(tǒng)引入的蛋白質(zhì)芯片研究
選用的自組裝試劑是11-巰基十一烷酸（MUA）,分子式為HS-（CH2）10-COOH,其一端的巰基（-SH）可以和Au發(fā)生化學(xué)吸附,形成的S-Au鍵鍵能約177kJ/mol,這種強(qiáng)的鍵合作用使得巰基化合物在金表面吸附有明顯的優(yōu)越性,另一端的羧基（-COOH）則暴露在基片的表面。另外從分子式還可以看出它是一個具有11個碳原子的長鏈有機(jī)分子,它一端的巰基與Au結(jié)合,另一端則可以與待測蛋白質(zhì)分子共價結(jié)合,這樣一來待測蛋白質(zhì)分子與基體表面就有11個碳原子的距離,很好的保持了待測蛋白質(zhì)分子原來的空間構(gòu)象,從而也就降低了檢測的假陰性率,提高了檢測的準(zhǔn)確性。自組裝之后,由于基片表面的羧基不能直接與人IgG上的氨基（-NH2）反應(yīng),需首先將羧基活化,使它變?yōu)榛顫婖?進(jìn)而才可以與氨基反應(yīng)。
在蛋白質(zhì)芯片上引入生物素-親和素系統(tǒng),它是以生物素-親和素之間具有很高的結(jié)合能力為基礎(chǔ),二者還可以偶聯(lián)抗原、抗體、酶、熒光素等大分子生物活性物質(zhì),它們的結(jié)合迅速、專一、穩(wěn)定。其中親合素是由4個相同的亞單位構(gòu)成的四聚體,每個親合素亞單位通過其結(jié)構(gòu)中的色氨酸殘基與生物素中的咪唑酮環(huán)結(jié)合。這樣1個親合素分子具有4個與生物素分子結(jié)合的位點(diǎn),使其具有放大效應(yīng)。親合素與生物素之間的親和力極強(qiáng),二者的親和系數(shù)（Ka）為1015mol-1,比抗原與抗體的親和力(Ka=10511mol-1)至少高104倍,所以能高速結(jié)合,而且反應(yīng)不受外界干擾,具有高度特異性和穩(wěn)定性。免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)部分是本文的重要內(nèi)容,實(shí)驗(yàn)中用到了酶標(biāo)儀,熒光掃描儀等儀器,主要內(nèi)容分為兩大部分:一是以酶作為標(biāo)記的在96孔板上做的微孔板ELISA實(shí)驗(yàn);二是以熒光分子作為標(biāo)記的在自制基片上做的微陣列實(shí)驗(yàn),每種實(shí)驗(yàn)又分為常規(guī)實(shí)驗(yàn)和加了生物素-親和素的實(shí)驗(yàn)。
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