背景^[1]

人直腸癌組織源細(xì)胞提取物是從人原代直腸癌組織源細(xì)胞提取的。人直腸癌組織源細(xì)胞提取物可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

應(yīng)用^[2-8]

人直腸癌組織源細(xì)胞是直接從生物體獲取細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。由于細(xì)胞剛剛從活體組織分離出來，故更接近于生物體內(nèi)的生活狀態(tài)。這一方法可為研究生物體細(xì)胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段。利用此方法還可直接服務(wù)于臨床實(shí)踐。例如，用從手術(shù)中切除的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，然后用該培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行抗癌藥物的篩選，根據(jù)腫瘤細(xì)胞對加入的化療藥物的敏感性來幫助選擇最有效的化療方案，有可能起到增強(qiáng)療效、降低副作用的作用。人直腸癌組織源細(xì)胞在學(xué)術(shù)研究、生物技術(shù)和醫(yī)藥領(lǐng)域中具有廣泛的應(yīng)用前景，具體表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：

一、用于癌癥研究，驗(yàn)證由細(xì)胞株研究獲得的結(jié)果；

二、預(yù)測個(gè)體樣本的反應(yīng)和排斥性，從而選擇最有效的抗癌藥物；

三、篩選最具選擇性或毒性的新藥化合物；

四、作為識(shí)別靶標(biāo)進(jìn)行抗腫瘤藥物篩選與模型建立等。

用于人直腸癌組織勻漿上清對樹突狀細(xì)胞的內(nèi)皮化影響

樹突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)是目前所知的機(jī)體內(nèi)功能最強(qiáng)的專職性抗原提呈細(xì)胞，是機(jī)體細(xì)胞免疫反應(yīng)的始動(dòng)者，在腫瘤免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)中具有獨(dú)特的地位。而在體內(nèi)，腫瘤組織通過分泌抑制性細(xì)胞因子營造特殊的微環(huán)境來影響樹突狀細(xì)胞的功能，從而逃脫機(jī)體的免疫監(jiān)視。

腫瘤浸潤樹突狀細(xì)胞前體在VEGF-A的影響下，發(fā)生內(nèi)皮細(xì)胞化，參與了腫瘤微血管的形成，從而促進(jìn)了腫瘤的生長、擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移。研究目的本實(shí)驗(yàn)研究直腸癌腫瘤微環(huán)境對DC的功能和細(xì)胞表型的影響，在體外利用直腸癌勻漿上清液作為人外周血來源的DC培養(yǎng)的誘導(dǎo)分化劑，來觀察DC內(nèi)皮化等表型變化的現(xiàn)象，探討腫瘤血管發(fā)生的新機(jī)制，為腫瘤治療提供一種新的治療靶點(diǎn)和治療思路。

方法1．免疫組化檢測腫瘤微血管處S-100蛋白的表達(dá)免疫組化SABC法對10例直腸癌及癌旁組織切片進(jìn)行檢測，來觀察腫瘤組織微血管壁及微血管旁有無S-100蛋白的表達(dá)，因S-100蛋白可作為樹突狀細(xì)胞的一種特異性標(biāo)記分子，可以間接推測腫瘤環(huán)境中DCs是否參與了腫瘤微血管的形成。

2．ELISA檢測勻漿上清液VEGF-A的含量將腫瘤組織200mg：1ml生理鹽水的比例制成腫瘤組織勻漿，用ELISA方法檢測癌及癌旁勻漿上清中VEGF-A活性因子含量的差異。

3．直腸癌勻漿上清對樹突狀細(xì)胞表型的影響從外周血來源的單核細(xì)胞來培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞，在DC發(fā)育的早期加入勻漿上清誘導(dǎo)其內(nèi)皮化。樹突狀細(xì)胞在培養(yǎng)至第7d前，可視為未成熟狀態(tài)。因此設(shè)第3d癌上清加入組，第3d癌旁上清加入組；第7d癌上清加入組，第7d癌旁上清加入組；并設(shè)未加上清的正常培養(yǎng)組作對照。

4．流式細(xì)胞學(xué)檢測培養(yǎng)細(xì)胞CD1a/CD31,CD1a/CD34雙陽性的表達(dá)FACS Calibar檢測，Cellquest分析軟件分析檢測結(jié)果。

5．免疫細(xì)胞化學(xué)檢測培養(yǎng)細(xì)胞vWF的表達(dá)對培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行單細(xì)胞懸液涂片，觀察內(nèi)皮性標(biāo)記分子vWF的表達(dá)情況。

結(jié)論

1、在直腸癌腫瘤微血管壁及血管旁均發(fā)現(xiàn)DC的出現(xiàn)，說明腫瘤組織浸潤的未成熟狀態(tài)的樹突狀細(xì)胞一部分趨化到腫瘤微血管處。

2、癌勻漿上清中活性因子VEGF-A的濃度明顯高于癌旁上清。3、癌及癌旁勻漿上清可以促使末成熟狀態(tài)的DC高表達(dá)雙陽性CD1a/CD31、CD1a/CD34和Vwf內(nèi)皮性標(biāo)記分子，使其趨向內(nèi)皮化。

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