玻璃酸酶性質、用途與生產工藝
玻璃酸鈉又名透明質酸鈉,是廣泛存在于動物和人體內的生理活性物質,在人皮膚、關節(jié)滑膜液、臍帶、房水、眼玻璃體中均有分布,由N-乙
酰葡萄糖醛酸反復交替而形成的一種高分子多糖體生物材料。
本品具有高度的粘彈性、可塑性、以及良好的生物相容性,在預防粘連和修復軟組織方面有明顯作用??捎糜谧冃蜗リP節(jié)病和肩關節(jié)周圍炎的
輔助治療,臨床上用于多種皮膚損傷,促進傷口愈合,對于擦傷及撕裂傷,腿部的潰瘍,糖尿病性潰瘍,壓迫性潰瘍,以及清創(chuàng)術、靜脈淤滯
性潰瘍等均有效。
玻璃酸鈉為關節(jié)滑液的主要成分,是軟骨基質的成分之一。在關節(jié)腔內起潤滑作用,可覆蓋和保護關節(jié)軟骨,改善關節(jié)攣縮,抑制軟骨變性變
化表面,改善病理性關節(jié)液,增加滴滑功能。
化學性質
玻璃酸酶系從哺乳動物睪丸中提取的一種能水解玻璃黏多糖的酶,是一種白色或微黃色粉末,在水中易溶,在乙醇、丙酮或乙醚中不溶。無臭。穩(wěn)定性較好,42
0C持續(xù)加熱60min活力不損失,100
0C 持續(xù)加熱5 min活力可保留80%。在低濃度的水溶液中較易失活,一般可用明膠或阿拉伯膠保護防止失活。Fe
2+、Cu
2+離子對酶有可逆抑制作用。Pb
2+、Hg
2+、Ni
2+、等離子對酶活性沒有明顯影響。在氯化鈉(0.15mol/L)或硫酸魚精蛋白的存在下,硫酸軟骨素B(皮膚素)、硫酸類肝素、硫酸角質素、肝素鈉及高濃度玻璃酸對玻璃酸酶的抑制作用可被逆轉。
玻璃酸酶注射液為玻璃酸酶加適宜的賦形劑,經冷凍干燥的無菌制品,為白色或類白色的凍干塊狀物或粉末。水溶液不穩(wěn)定,需臨用前配制。
用途
玻璃酸酶可作為蛋分分解酶。一般可用來加速肌肉、皮下注射藥液的吸收,減輕注射部位疼痛,促進局麻藥的浸潤,有利于促進手術及創(chuàng)傷后局部水腫或血腫的消散。也可用于腸粘連。但是水楊酸類能抑制玻璃酸酶的作用。不能靜脈注射。用前先做皮試,以免出現過敏反應。感染及腫痛部位禁用,以防引起擴散。小鼠皮下注射LD
50>25萬單位/kg;小鼠肌肉注射LD
50>1.25萬單位/kg。
皮下或肌肉注射,150~1500U/次,1日1~2次,先用生理鹽水或注射用水溶解,再與其他注射劑混合使用;皮下輸液,100ml大輸液中加本品150U。
用途
該品為抗高血壓藥。小鼠口服LD50為122ml/kg,大鼠LD50為90ml/kg。
生產方法
由1-氯代酞嗪(見9720)經肼化而將1-氯代酞嗪加到水合肼中,在87-89℃攪拌回流12h,趁熱過濾。濾液冷卻結晶,過濾,得肼酞嗪。肼酞嗪用15%相加酸溶解成鹽,再加乙醇使結晶析出,可得肼酞嗪鹽酸鹽。
生產方法
方法一、牛羊睪丸提取法
切碎、提取將凍凍或新鮮羊睪丸洗凈,剝除內外層及副睪丸,切碎,用絞肉機絞成糜漿,稱取100kg,倒入預先配好的乙酸溶液(水90L、冰醋酸0.6L、1mol/L鹽酸10L 混合而成)中,在-5
0以下的凍庫中,每隔15min用力攪拌3~5min,使之充分提取4h,然后進行扯漿,得漿液約125~140L。漿渣備第2次提取玻璃酸酶用。
羊睪丸
Hac;HCl;-50→
提取提取液
鹽析、吊濾取第一次漿液,在不斷攪拌下每升漿液中加入硫酸銨(工業(yè)用)210g。使之安全溶解,靜止1h后,轉入雙層用滌綸袋吊濾,反復兩次。次日得澄清濾液,在不斷攪拌下每升加入硫酸銨290g。使之完全溶解,靜止1h 后,用滌綸袋吊濾,過夜,次日拆袋,得粗制品。
提取液
(NH42SO4→
鹽析;吊濾粗品
鹽析、透析取精品溶于5L的冰冷蒸餾水中,緩緩加入硫酸銨固體125g,并不斷攪拌,使之完全溶解,于冷庫中靜置過夜,次日除去液面油脂,用膠管虹吸中層清液,用布氏漏斗過濾,上層和底層沉淀最后用布氏漏斗過濾,合并濾液。在濾液中緩緩加入750g硫酸銨,充分攪拌,待完全溶解后,于冷庫中放置過夜。次日,棄去上層清液(如上層溶液渾濁不清,可在冷庫中放置3~5d ,待上層溶液變清)得鹽析沉淀物,再溶于0.5L冰蒸餾水中,進行透析,每袋約100ml,放在pH6.5的磷酸鹽-枸櫞酸緩沖液[枸櫞酸7.5g、磷酸氫二鈉(12個結晶水)62g、氯化鈉70g加水配制成2500ml,用枸櫞調整pH6.5]2500ml中,于冷庫透析24h,得透析液。酶活力約250000U/ml。
粗品
(NH4)2so4;磷酸鹽-枸櫞酸→
pH6.5;鹽析;透析透析液
去熱原、干燥將透析液離心分離,離心液置于冰冷的水溶中,加入Na
3PO
4·12H
2O(150g/L即15%)溶液50ml, 緩緩加入乙酸鈣(200g/L即20%)30ml,并不斷攪拌。隨后用氫氧化鈉(0.5mol/L)調節(jié)pH至8.5,繼續(xù)攪拌10min,4號垂熔玻璃漏斗過濾(濾并瓶放在冰水浴中),濾液用鹽酸( 0.5mol/L)中和pH為7,冷凍干燥,得酶精制品。
透析液
Na3PO4;Ca(Ac)2; pH8.5→
去熱原精制品
HCl;pH7→干燥干精制品
凍干制劑取一定量精制品溶于5%的明膠注射用水溶液中,用氫氧化鈉調節(jié)pH5~7,除菌,過濾,分裝,每瓶0.5ml, 冷凍干燥,即得注射用玻璃酸酶制劑,每瓶含玻璃酸酶100或150U,按睪丸質量計算收率約為20000U/kg。
干精制品
5%水解明膠;pH6→
制劑凍干制劑成品
方法二微生物發(fā)酵法
培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)基;
淀粉1份;棉子餅1份;谷胱粉1份;
干酵母1份;磷酸氫二鉀0.1份
鏈霉菌;300C;3d→
發(fā)酵發(fā)酵液
消泡劑0.4%
沉淀、分離
發(fā)酵液→濃縮液
丙酮→
沉淀粗品
色譜柱→
分離精制品
冷凍、干燥
精制品
5%水解明膠→
冷凍干燥凍干制劑成品
玻璃酸酶
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