307005-25-0
中文名稱
干擾素
英文名稱
INTERFERON ALPHA RECOMBINANT RAT
CAS
307005-25-0
更新日期
2025/02/06 17:06:57
基本信息
中文別名
干擾素人纖維母細(xì)胞干擾素
英文別名
interferon alpha1BMouse Interferon γ elisa kit
INTERFERON ALPHA RECOMBINANT RAT
INTERFERON ALPHA RECOMBINANT RAT USP/EP/BP
所屬類(lèi)別
生物化學(xué)品: 多肽及蛋白質(zhì)類(lèi): 細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子物理化學(xué)性質(zhì)
外觀性狀干擾素是一類(lèi)在同種細(xì)胞上具有廣譜抗病毒活性的蛋白質(zhì)，耐酸，具有多種生物活性，但對(duì)各種蛋白酶敏感，可被胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶破壞而失去活性。種屬特異性很強(qiáng)，只有在同種細(xì)胞上才具有抗病毒作用。干擾素的沉降率低，不能透析，可通過(guò)濾菌器。
儲(chǔ)存條件−70°C
形態(tài)buffered aqueous solution
CAS 數(shù)據(jù)庫(kù)307005-25-0
應(yīng)用領(lǐng)域
用途1
具有廣譜抗病毒作用，治療乙型肝炎、丙型肝炎、皰疹、宮頸炎、紅眼病、尖銳濕疣等。治療毛細(xì)胞白血病。注射用于擾素可治療多發(fā)性骨髓瘤、卡波濟(jì)氏肉瘤、惡性黑色素瘤及喉乳頭瘤。不良反應(yīng)：肌注可見(jiàn)發(fā)熱、頭痛、肌痛、少數(shù)人有疲乏無(wú)力、胃納不佳；靜注可出現(xiàn)高熱、寒戰(zhàn)、嘔吐、腎損害、心率加快及血壓不穩(wěn)定。
制備方法
方法1
方法一、Cantell氏法分離灰黃層 將血液400ml放入含有ACD抗凝劑的塑料袋，離心取血漿，吸取灰黃層13-15ml，放于冰箱4℃過(guò)夜。
血液[ACD抗凝劑]→血漿[吸取]→[4℃]灰黃層
氯化銨處理 灰黃層加30ml緩沖鹽水溶液，再加9倍量冷的8.3g/L氯化銨液，混勻，4℃靜置10min，離心(8000r/min) 20min，去溶血上清液，加入緩沖鹽液，收集細(xì)胞沉淀，做成懸液。用氯化銨液重復(fù)處理一次，溶解殘留紅細(xì)胞。取沉淀的白細(xì)胞懸于培養(yǎng)液，置于冰浴。
灰黃層[緩沖鹽液，氯化銨液]→[4℃離心 8000r/min]細(xì)胞沉淀[氯化銨]→白細(xì)胞懸液
誘生 將稀釋的細(xì)胞懸液加白細(xì)胞干擾素，使其最后濃度達(dá)到100U/ml，37℃恒溫水浴攪拌培養(yǎng)2h。誘生后的白細(xì)胞加入仙臺(tái)病毒，使其最后濃度為100-150血凝U/ml。37℃攪拌過(guò)夜。
白細(xì)胞懸液[白細(xì)胞干擾素、仙臺(tái)病毒]→[37℃]干擾素培養(yǎng)液
離心 次日將培養(yǎng)物于2500 r/min離心30 min，取上清液即得干擾素粗品，取樣測(cè)定即可。
干擾素培養(yǎng)液[離心]→干擾素粗品
干擾素的初步精制 將干擾素粗品加入硫氰酸鉀至0.5mol/L，用鹽酸調(diào)pH 3.5，離心，棄上清液，將沉淀物加入94%冷乙醇，離心棄沉淀，上清液用鹽酸調(diào)pH 5.5，離心棄沉淀，調(diào)pH 5.8，離心，分別處理上清液和沉淀。
沉淀I精制 將以上沉淀I加入pH2的甘氨酸-鹽酸緩沖液(原體積1/50量)溶解，檢測(cè)，得IIFN。
沉淀I[甘氨酸-鹽酸緩沖液]→[pH2]IIFN
上清液II的處理 上清液II調(diào)pH為8，離心，棄上清液，沉淀加0.1 mol/L PB(原體積1/50量)、0.5 mol/L硫氰酸鉀(pH為8)溶解，pH降至 5.5，離心，分別處理上清液和沉淀。
沉淀加0.1 mol/L PB(原體積1/2500量、pH 8)溶解，調(diào)pH為7-7.5，對(duì)PB(pH7.3)透析，次日離心，取上清液，檢測(cè)，得PIFN-B。
沉淀[PB透析]→[pH7-7.5]上清液(PIFN-B)
上清液pH降至3，離心，沉淀加入0.1 mol/L PB(原體積1/5000量、pH8)溶解，調(diào)pH為7-7.5，對(duì)PB(pH 7.3)透析過(guò)夜，離心，取上清液，檢測(cè)，得PIFN-A。
上清液[離心]→[pH3]沉淀[PB]→[pH7-7.5]上清液(PIFN-A)
方法二、童葵塘法
血細(xì)胞制備 取血液200ml，低速離心去上層血漿，保留白細(xì)胞和紅細(xì)胞，加入肝素(1300 U/ml) 2ml 和培養(yǎng)液至原血量，加入卡那霉素至濃度為100 μg/ml。
血液[2ml肝素、卡那霉素]→血漿
起動(dòng)誘生 將以上血漿，加適量干擾素，使最終濃度為100U/ml，37℃恒溫水浴1h，每15min振搖1次。
血漿[干擾素]→[37℃]血細(xì)胞培養(yǎng)液
正式誘生 啟動(dòng)后的血細(xì)胞加入新城雞瘟F系病毒，使其最后濃度為64-128血凝單位，37℃恒溫水浴1h，每15min振搖1次，低速離心去上清液。加入肝素4ml、白蛋白培養(yǎng)液(0.2%)200 m1，并加入卡那霉素至濃度為100 μg/ml。置37℃旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)18-20h。
血細(xì)胞培養(yǎng)液[F系病毒]→[37℃]沉淀[肝素、白蛋白、卡那霉素]→[37℃]培養(yǎng)物
收獲與酸處理 次日，將培養(yǎng)物離心(2000r/min)，吸取上清液，鹽酸調(diào)pH 2，4℃放5天。再用氫氧化鈉調(diào)pH 6-7，有咖啡色絮狀沉淀生成，4℃放2-3天，沉淀分離取上清液，合并及除菌過(guò)濾，得粗制干擾素。
培養(yǎng)物[離心]→上清液[氫氧化鈉]→[pH2, 4℃, pH6-7]干擾素粗品
干擾素的初步精制 將干擾素粗晶加入硫氰酸鉀至0.5 mol/L，用鹽酸調(diào)pH 3.5，離心，棄上清液，將沉淀物加入94%冷乙醇，離心棄沉淀，上清液用鹽酸調(diào)pH 5.5，離心棄沉淀，調(diào)pH 5.8，離心，分別處理上清液和沉淀。
沉淀I精制 將以上沉淀I加入pH2的甘氨酸-鹽酸緩沖液(原體積1/50量)溶解，檢測(cè)，得IIFN。
沉淀I[甘氨酸-鹽酸緩沖液]→[pH2]IIFN
上清液II的處理 上清液II調(diào)pH為8，離心，棄上清液，沉淀加0.1mol/L PB(原體積1/50量)、0.5 mol/L硫氰酸鉀(pH為8)溶解，pH降至5.5，離心，分別處理上清液和沉淀。
沉淀加0.1 mol/L PB(原體積1/2500量、pH 8)溶解，調(diào)pH為7-7.5，對(duì)PB(pH 7.3)透析，次日離心，取上清液，檢測(cè)，得PIFN-B。
沉淀[PB透析]→[pH為7-7.5]上清液(PIFN-B)
上清液pH降至3，離心，沉淀加入0.1 mol/L PB(原體積1/5000量、pH8) 溶解，調(diào)pH為7-7.5，對(duì)PB(pH 7.3)透析過(guò)夜，離心，取上清液，檢測(cè)，得PIFN-A。
上清液[離心]→[pH3]沉淀[PB]→[pH7-7.5]上清液(PIFN-A)。