"BALB/3T3 clone A31 Cell|小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

細(xì)胞背景資料：胚胎；成纖維；自發(fā)永生；雄性；BALB/c

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

解凍細(xì)胞常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)問(wèn)題分析及推薦解決方法：在解凍凍存細(xì)胞時(shí)，發(fā)現(xiàn)會(huì)出現(xiàn)存活率低、大量細(xì)胞碎片及生長(zhǎng)緩慢等問(wèn)題，究竟是什么原因?qū)е?，我們?cè)撛趺催M(jìn)行解決？以下是國(guó)內(nèi)外細(xì)胞培養(yǎng)專家針對(duì)解凍細(xì)胞實(shí)驗(yàn)問(wèn)題，總結(jié)的一些解決方案！出現(xiàn)低存活率的可能原因及推薦解決方案如下：１)解凍過(guò)程中細(xì)胞裂解，推薦的解決方案：可預(yù)期到一定量的細(xì)胞死亡，因此細(xì)胞的濃度應(yīng)足夠GAO，考慮到這一損失。起始濃度為１*１０(６)至１*１０(７)細(xì)胞/毫升；２)解凍過(guò)程中的問(wèn)題，推薦的解決方案：在-７０℃至-８０℃下保存冷凍的培養(yǎng)物，保存時(shí)間為１-５天，但這不是保存的方法。在３７℃充分解凍后應(yīng)立即開(kāi)始培養(yǎng)；３)對(duì)冷凍液過(guò)敏，推薦的解決方案：A.完全或部分更換培養(yǎng)基，減少培養(yǎng)基中冷凍液的量。在２４小時(shí)后更換培養(yǎng)液體可全部去除冷凍液。B.留出更多時(shí)間供培養(yǎng)物恢復(fù)。有時(shí)細(xì)胞需要幾周時(shí)間才能形成單層或密集的懸浮物，取決于冷凍時(shí)細(xì)胞的年齡或傳代次數(shù)或在生長(zhǎng)階段中的位置。冷凍的Zui佳條件在對(duì)數(shù)期；４)被冷凍的原種細(xì)胞的年齡或冷凍時(shí)培養(yǎng)物的年齡，推薦的解決方案：解凍Zui近冷凍的細(xì)胞。細(xì)胞處于冷凍狀態(tài)的時(shí)間越長(zhǎng)，存活率越低。檢查冷凍細(xì)胞的時(shí)間和方法。在冷凍時(shí)細(xì)胞應(yīng)處于對(duì)數(shù)期。

細(xì)胞生長(zhǎng)：貼壁

PLC-PRF-5細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NCIH345細(xì)胞、DU 4475細(xì)胞、207細(xì)胞

KASUMI1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：9L細(xì)胞、Daoy細(xì)胞、3T3-A31細(xì)胞

HCCLM3細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HAEC細(xì)胞、NK92-MI細(xì)胞、HOP 92細(xì)胞

MSF細(xì)胞類似產(chǎn)品：：H2227細(xì)胞、AN-3細(xì)胞、BNL 1MEA.7R.1細(xì)胞

CHO K1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：RT-112細(xì)胞、RINm5F細(xì)胞、H-719細(xì)胞

細(xì)胞物種來(lái)源：人源或鼠源等其它物種來(lái)源

BALB/3T3 clone A31 Cell|小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

[細(xì)胞產(chǎn)品包裝]鮮活細(xì)胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細(xì)胞：１ml凍存管(兩支)

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，總是會(huì)出現(xiàn)各種意想不到的問(wèn)題，一不留神就會(huì)全盤(pán)皆輸。所謂細(xì)胞虐我千百遍，我待細(xì)胞如初戀。下面是貼壁細(xì)胞的保藏方法，希望對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)初學(xué)操作者有所幫助：1)觀察細(xì)胞狀態(tài)：貼壁細(xì)胞密度達(dá)到85-90%，即可以細(xì)胞凍存形式進(jìn)行保藏，拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)；2)細(xì)胞清洗：培養(yǎng)皿表面消毒后，轉(zhuǎn)移至生物安全柜中，去除培養(yǎng)皿中培養(yǎng)液，加入12mlPBS，輕輕搖晃培養(yǎng)皿清洗細(xì)胞，隨后吸除PBS清洗液；3)細(xì)胞消化：將2ml胰酶加入培養(yǎng)皿中，完全覆蓋細(xì)胞，置于顯微鏡下觀察（期間禁止搖晃培養(yǎng)皿），當(dāng)細(xì)胞剛開(kāi)始脫落時(shí)，立即轉(zhuǎn)移至生物安全柜中，除去大部分胰酶，剩余約0.5ml胰酶，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)消化，每30秒肉眼觀察細(xì)胞狀態(tài)，至細(xì)胞成流沙狀完全脫落，轉(zhuǎn)移至生物安全柜中，加入12ml完全培養(yǎng)基，終止消化；4)細(xì)胞離心：將終止消化后的細(xì)胞懸液吹打均勻，吸取至15ml離心管中，1000r/min（110g），離心3min；5)細(xì)胞凍存：離心后去除細(xì)胞上清液，按照凍存細(xì)胞量5*10^5/ml，吸取凍存液重懸細(xì)胞沉淀，吹打均勻后分裝至相應(yīng)的凍存管中，進(jìn)行凍存；6)細(xì)胞保藏：凍存管做HAO標(biāo)記，放至程序降溫盒中，于4℃冰箱放置30min，轉(zhuǎn)移至-80℃超低溫冰箱過(guò)夜，將過(guò)夜后的凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)移至液氮中保藏。

H1623細(xì)胞類似產(chǎn)品：：OCILY7細(xì)胞、HO-8910PM細(xì)胞、mouse Inner Medullary Collecting Duct-3細(xì)胞

HuH6細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Mel526細(xì)胞、LC1細(xì)胞、Wistar Institute, Susan Hayflick細(xì)胞

EFO 27細(xì)胞類似產(chǎn)品：：TU 686細(xì)胞、Kit-225細(xì)胞、JB6 [Mouse]細(xì)胞

BE2C細(xì)胞類似產(chǎn)品：：H.Ep.-2細(xì)胞、DLD1細(xì)胞、LA4細(xì)胞

細(xì)胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明：來(lái)源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細(xì)胞庫(kù)

H1623細(xì)胞類似產(chǎn)品：：OCILY7細(xì)胞、HO-8910PM細(xì)胞、mouse Inner Medullary Collecting Duct-3細(xì)胞

HuH6細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Mel526細(xì)胞、LC1細(xì)胞、Wistar Institute, Susan Hayflick細(xì)胞

EFO 27細(xì)胞類似產(chǎn)品：：TU 686細(xì)胞、Kit-225細(xì)胞、JB6 [Mouse]細(xì)胞

BE2C細(xì)胞類似產(chǎn)品：：H.Ep.-2細(xì)胞、DLD1細(xì)胞、LA4細(xì)胞

細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞培養(yǎng)中的污染分為兩類，化學(xué)污染和生物污染；生物污染包括比較容易發(fā)現(xiàn)的細(xì)菌、霉菌和酵母的污染，和較難發(fā)現(xiàn)的病毒、支原體和其他細(xì)胞的污染。細(xì)菌、霉菌和酵母到處存在，它們能在合適的環(huán)境中非?？焖俚纳L(zhǎng)。這些污染比較容易觀察到，它們往往會(huì)使其污染的培養(yǎng)液產(chǎn)生可見(jiàn)的變化，或者通過(guò)顯微鏡觀察就可以看見(jiàn)。由于病毒有種屬異性，所以病毒污染的概率比較小。但是病毒污染難于發(fā)現(xiàn)，因?yàn)椴《绢w粒別微小，一般的實(shí)驗(yàn)室都沒(méi)能力檢查細(xì)胞培養(yǎng)中污染的病毒。由于病毒一般潛伏在細(xì)胞內(nèi)，對(duì)整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)不是致死的，所以它可能會(huì)使研究人員長(zhǎng)期得到受病毒影響的細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。1956年Robinson及其同事首次發(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染。90年代初的一個(gè)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在美國(guó)培養(yǎng)的細(xì)胞中，至少有15%被支原體污染。由于支原體沒(méi)有細(xì)胞壁，在細(xì)胞培養(yǎng)液中幾乎是透明的，同時(shí)對(duì)常用于細(xì)胞培養(yǎng)中的抗生素不敏感，不引起pH變化，不使培養(yǎng)液渾濁，所以支原體污染不容易被發(fā)現(xiàn)，但是其存在會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。培養(yǎng)多種細(xì)胞時(shí)操作不當(dāng)，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的交叉污染。由于不同細(xì)胞的生產(chǎn)速率不同，污染的生長(zhǎng)速率快的細(xì)胞終會(huì)完全取代被污染的細(xì)胞。

H-446細(xì)胞類似產(chǎn)品：：U251-MG細(xì)胞、Hs 888.T細(xì)胞、A9(Hamprecht)細(xì)胞

A101D細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SNU-C2B細(xì)胞、NCI-A549細(xì)胞、B6Tert-1細(xì)胞

Fox/NY細(xì)胞類似產(chǎn)品：：ZR751細(xì)胞、HCS-2/8細(xì)胞、SNB-19細(xì)胞

NPA'87細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Lewis-Lung細(xì)胞、HBZY1細(xì)胞、87 MG細(xì)胞

Centre Antoine Lacassagne-85-1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：CHP-212細(xì)胞、Caco2BBe細(xì)胞、MDA330細(xì)胞

U-138MG細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NS-20Y細(xì)胞、PC-9S1細(xì)胞、HFTF細(xì)胞

MKN1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MDCK2細(xì)胞、KLN-205細(xì)胞、Ly3細(xì)胞

KAT5細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HTori-3.1細(xì)胞、MHH-CALL2細(xì)胞、H-1404細(xì)胞

OB2細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Lieming Xu-2細(xì)胞、OCI/AML4細(xì)胞、A2780細(xì)胞

NCI H157細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Hs-606-T細(xì)胞、HPAF/CD18細(xì)胞、KGN細(xì)胞

BALB/3T3 clone A31 Cell|小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

Ocular Choroidal Melanoma-1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：XuanWei Lung Cancer-05細(xì)胞、A375-SM細(xì)胞、CHP 212細(xì)胞

CAL-85-1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SW837細(xì)胞、WIL2 Secreting細(xì)胞、NCI-H1688細(xì)胞

NCIH187細(xì)胞類似產(chǎn)品：：J774.A1細(xì)胞、CMT.64細(xì)胞、HMEC1細(xì)胞

SNK1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：H1882細(xì)胞、NCI-H847細(xì)胞、Human Hepatocyte Line 5細(xì)胞

H1666細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Hs 888.Lu細(xì)胞、H-2122細(xì)胞、LA795細(xì)胞

WM 2664細(xì)胞類似產(chǎn)品：：TE-9細(xì)胞、SK-MEL24細(xì)胞、MV411細(xì)胞

HFT8810細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MV 3細(xì)胞、Bac12F5細(xì)胞、CCD1095Sk細(xì)胞

RF/6A細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HT-29/CX-1細(xì)胞、RGM1細(xì)胞、LU65細(xì)胞

UCLA RO-81-A-1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：293 EBNA細(xì)胞、Molm 13細(xì)胞、SUDHL8細(xì)胞

SuDHL 8細(xì)胞類似產(chǎn)品：：ACC-M細(xì)胞、Duck embryo細(xì)胞、SK-MEL-28細(xì)胞

Microbiological Associates-104細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HR1K細(xì)胞、KG-1a細(xì)胞、LN 382細(xì)胞

CNE1-LUC細(xì)胞類似產(chǎn)品：：TE3A細(xì)胞、C643細(xì)胞、H-889細(xì)胞

HCT 15細(xì)胞類似產(chǎn)品：：COV 434細(xì)胞、NCIH2170細(xì)胞、MSTO211H細(xì)胞

PTK1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：UPCISCC154細(xì)胞、CHP 100細(xì)胞、GLRK 13細(xì)胞

CAL 27細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NIH:OVCAR-4細(xì)胞、OCI Ly19細(xì)胞、H1373細(xì)胞

SHI1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：RAG細(xì)胞、U266 Bl細(xì)胞、LIM1215細(xì)胞

SW 579細(xì)胞類似產(chǎn)品：：ATN-1細(xì)胞、WM 115細(xì)胞、EPC細(xì)胞

PANC403細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MFM223細(xì)胞、Hs294T細(xì)胞、H-929細(xì)胞

3T3L1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：CATHa細(xì)胞、RKOAS451細(xì)胞、HCC-2185細(xì)胞

HcaF細(xì)胞類似產(chǎn)品：：H8細(xì)胞、YD-15細(xì)胞、RT-112細(xì)胞

JVM-3細(xì)胞類似產(chǎn)品：：KYSE180細(xì)胞、HEL92.1.7細(xì)胞、Tca8113細(xì)胞

SVEC4-10細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Hx147細(xì)胞、CORL88細(xì)胞、Hs 729.T細(xì)胞

GFP-Olig2細(xì)胞類似產(chǎn)品：：hTERT-RPE細(xì)胞、AML 12細(xì)胞、NCIH1618細(xì)胞

PC 12細(xì)胞類似產(chǎn)品：：RPMI-2650細(xì)胞、RPMI 6666細(xì)胞、SKN-SH細(xì)胞

KLM1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：EU-4細(xì)胞、ESC-410細(xì)胞、NCIH2110細(xì)胞

University of Arizona Cell Culture-812細(xì)胞類似產(chǎn)品：：WEHI 231細(xì)胞、HCC-1143細(xì)胞、NCIH460細(xì)胞

H-650細(xì)胞類似產(chǎn)品：：LCLC103H細(xì)胞、ARO 81-1細(xì)胞、AtT 20細(xì)胞

28SC細(xì)胞類似產(chǎn)品：：CCC-ESF-1細(xì)胞、HEC1A細(xì)胞、COLO201細(xì)胞

OP9細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SNU354細(xì)胞、P3X63 Ag8細(xì)胞、HCC-1187細(xì)胞

BALB/3T3 clone A31 Cell|小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

NCI-H676細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SKN-SH細(xì)胞、OCILY-3細(xì)胞、BC-027細(xì)胞

GTL16細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NCI-H1184細(xì)胞、H-1341細(xì)胞、MBVP細(xì)胞

TALL 1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Michigan Cancer Foundation-12F細(xì)胞、SW837細(xì)胞、MPC-5細(xì)胞

FAT細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Dunn LM8細(xì)胞、IPLB-SF 21AE細(xì)胞、H1650_CO細(xì)胞

Ramos (RA 1)細(xì)胞類似產(chǎn)品：：hESC細(xì)胞、K7M2 wt細(xì)胞、SW-1990細(xì)胞

RKO細(xì)胞類似產(chǎn)品：：WM451Lu細(xì)胞、SKML-28細(xì)胞、HSC（Human Schwann）細(xì)胞

MDAPCa-2b細(xì)胞類似產(chǎn)品：：TOV-112D細(xì)胞、U-373MG細(xì)胞、HS-683細(xì)胞

SW48細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NCI-H2452細(xì)胞、LAN5細(xì)胞、RS4:11細(xì)胞

JeKo 1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HPAF-2細(xì)胞、TE-8細(xì)胞、hOMF細(xì)胞

H2195細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NCI-SNU-449細(xì)胞、COLO679細(xì)胞、NCI H716細(xì)胞

SW-480細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NCI-H78細(xì)胞、MSB-1細(xì)胞、BALL-1細(xì)胞

MT-2J細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SKNAS細(xì)胞、FUOV1細(xì)胞、293/EBNA細(xì)胞

Hs-852-T細(xì)胞類似產(chǎn)品：：U-343MG細(xì)胞、H-295R細(xì)胞、ACC2細(xì)胞

HT 1080細(xì)胞類似產(chǎn)品：：KG1A細(xì)胞、SKNBE(2)細(xì)胞、RMG-1細(xì)胞

WISH細(xì)胞類似產(chǎn)品：：OLN 93細(xì)胞、OVCA433細(xì)胞、SW-1116細(xì)胞

Lu99A細(xì)胞類似產(chǎn)品：：B16-F1細(xì)胞、Renal Carcinoma細(xì)胞、MBT2細(xì)胞

IM-9細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SW948細(xì)胞、CPA47細(xì)胞、NCL-H548細(xì)胞

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