"NCI-H740 Cell|人肺癌細(xì)胞

細(xì)胞背景資料：詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

解凍細(xì)胞常見實(shí)驗(yàn)問題分析及推薦解決方法：在解凍凍存細(xì)胞時(shí)，發(fā)現(xiàn)會(huì)出現(xiàn)存活率低、大量細(xì)胞碎片及生長緩慢等問題，究竟是什么原因?qū)е?，我們該怎么進(jìn)行解決？以下是國內(nèi)外細(xì)胞培養(yǎng)專家針對解凍細(xì)胞實(shí)驗(yàn)問題，總結(jié)的一些解決方案！出現(xiàn)低存活率的可能原因及推薦解決方案如下：１)解凍過程中細(xì)胞裂解，推薦的解決方案：可預(yù)期到一定量的細(xì)胞死亡，因此細(xì)胞的濃度應(yīng)足夠GAO，考慮到這一損失。起始濃度為１*１０(６)至１*１０(７)細(xì)胞/毫升；２)解凍過程中的問題，推薦的解決方案：在-７０℃至-８０℃下保存冷凍的培養(yǎng)物，保存時(shí)間為１-５天，但這不是保存的方法。在３７℃充分解凍后應(yīng)立即開始培養(yǎng)；３)對冷凍液過敏，推薦的解決方案：A.完全或部分更換培養(yǎng)基，減少培養(yǎng)基中冷凍液的量。在２４小時(shí)后更換培養(yǎng)液體可全部去除冷凍液。B.留出更多時(shí)間供培養(yǎng)物恢復(fù)。有時(shí)細(xì)胞需要幾周時(shí)間才能形成單層或密集的懸浮物，取決于冷凍時(shí)細(xì)胞的年齡或傳代次數(shù)或在生長階段中的位置。冷凍的Zui佳條件在對數(shù)期；４)被冷凍的原種細(xì)胞的年齡或冷凍時(shí)培養(yǎng)物的年齡，推薦的解決方案：解凍Zui近冷凍的細(xì)胞。細(xì)胞處于冷凍狀態(tài)的時(shí)間越長，存活率越低。檢查冷凍細(xì)胞的時(shí)間和方法。在冷凍時(shí)細(xì)胞應(yīng)處于對數(shù)期。

細(xì)胞生長：貼壁

H-2196細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HTori 3細(xì)胞、PANC3.27細(xì)胞、C1R細(xì)胞

Y3.AG.1.2.3細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Rat Fetal Lung-6細(xì)胞、C-4 I細(xì)胞、T241細(xì)胞

NL20細(xì)胞類似產(chǎn)品：：RIN m5F細(xì)胞、Colon 38細(xì)胞、COLO-829細(xì)胞

H838細(xì)胞類似產(chǎn)品：：E.G7-OVA細(xì)胞、MX1細(xì)胞、Mink細(xì)胞

DH-82細(xì)胞類似產(chǎn)品：：H196細(xì)胞、RCC10RGB細(xì)胞、AMO-1細(xì)胞

細(xì)胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

NCI-H740 Cell|人肺癌細(xì)胞

[細(xì)胞產(chǎn)品包裝]鮮活細(xì)胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細(xì)胞：１ml凍存管(兩支)

傳代的操作步驟注意事項(xiàng)：1)操作前要洗手，進(jìn)入超凈臺(tái)后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。2)點(diǎn)燃酒精燈，操作在火焰附近進(jìn)行，耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼，金屬器械燒灼時(shí)間不能太長，以免退火，并冷卻后才能夾取組織，吸取過營養(yǎng)液的用具不能再燒灼，以免燒焦形成碳膜。3)操作動(dòng)作要準(zhǔn)確敏捷，但又不能太快，以防空氣流動(dòng)，增加污染機(jī)會(huì)。4)不能用手觸已消毒器皿的工作部分，工作臺(tái)面上用品要布局合理。5)瓶子開口后要盡量保持45℃斜位。6)吸溶液的吸管等不能混用。貼壁細(xì)胞傳代的操作步驟：1)吸除培養(yǎng)瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。2)向瓶內(nèi)加入胰蛋白酶和EDTA混合液少許，以能覆滿瓶底為限。3)置溫箱中2-5分鐘，當(dāng)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大后，立即終止消化。4)吸除消化液，向瓶內(nèi)注入Hanks液數(shù)毫升，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，把殘余消化液沖掉。注意加Hanks液沖洗細(xì)胞時(shí)，動(dòng)作要輕，以免把已松動(dòng)的細(xì)胞沖掉流失，如用胰蛋白酶液單獨(dú)消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液沖洗，直接加入培養(yǎng)液。5)用吸管吸取營養(yǎng)液輕輕反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。6)計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，把細(xì)胞懸液分成等份分裝入數(shù)個(gè)培養(yǎng)瓶中，置溫箱中培養(yǎng)。懸浮細(xì)胞傳代的操作步驟：1)吸出細(xì)胞培養(yǎng)液，放入離心管中，離心1000rpm5分鐘。2)吸掉上清液，加入適量之新鮮培養(yǎng)基，混和均勻后，依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。

NPA 87細(xì)胞類似產(chǎn)品：：L-6TG細(xì)胞、32Dcl3細(xì)胞、Swiss 3T3細(xì)胞

NCIH1688細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NCI-H23細(xì)胞、AGS細(xì)胞、786-0WT細(xì)胞

MFD-1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：LAPC-4細(xì)胞、JHH-7細(xì)胞、MC3T3-E1 Subclone 24細(xì)胞

NIH3T3細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MGH-U1細(xì)胞、266 Bl細(xì)胞、TE-4細(xì)胞

細(xì)胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

細(xì)胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細(xì)胞庫

NPA 87細(xì)胞類似產(chǎn)品：：L-6TG細(xì)胞、32Dcl3細(xì)胞、Swiss 3T3細(xì)胞

NCIH1688細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NCI-H23細(xì)胞、AGS細(xì)胞、786-0WT細(xì)胞

MFD-1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：LAPC-4細(xì)胞、JHH-7細(xì)胞、MC3T3-E1 Subclone 24細(xì)胞

NIH3T3細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MGH-U1細(xì)胞、266 Bl細(xì)胞、TE-4細(xì)胞

細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分

細(xì)胞系永生化原理介紹：多數(shù)正常細(xì)胞的壽命是有限的，能傳20-100代，但有些細(xì)胞，尤其是來自嚙齒類或來自多數(shù)腫瘤的細(xì)胞，可以產(chǎn)生具有無限壽命的連續(xù)細(xì)胞系。嚙齒類動(dòng)物細(xì)胞在分離時(shí)核型是正常的，在傳到12代左右以后可能出現(xiàn)危相，多數(shù)細(xì)胞在這個(gè)階段死亡了，但少數(shù)細(xì)胞存活下來，并擁有了更GAO的生長率，成為連續(xù)細(xì)胞系。目前認(rèn)為永生化是一個(gè)多步驟的過程，包括一系列細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)基因(如Rb和p53)失活。目前主要從兩個(gè)方向進(jìn)行操作，病毒基因致永生化和端粒酶誘導(dǎo)的永生化，其原理如下：SV40 LT基因常用于誘導(dǎo)永生化。這個(gè)基因的產(chǎn)物-T抗原，可與Rb和p53結(jié)合。這樣不僅使細(xì)胞增殖的壽命得以延長，同時(shí)也限制了如p53這樣基因的DNA監(jiān)控活性，從而使基因組的不穩(wěn)定性增加，也增加了向永生化發(fā)展的進(jìn)一步突變的機(jī)會(huì)(如上調(diào)端粒酶或下調(diào)端粒酶抑制物的活性)。用含可調(diào)節(jié)啟動(dòng)子的端粒酶基因進(jìn)行轉(zhuǎn)染，足以形成永生化細(xì)胞。這些基因中已被廣泛應(yīng)用的有：EBV用于淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞；SV40 LT用于黏附細(xì)胞，如成纖維細(xì)胞(Mayne et al., 1996)、 角質(zhì)形成細(xì)胞(Steinberg,1996) 和內(nèi)皮細(xì)胞(Punchard et al.,1996)等;而hTERT則用于間充質(zhì)干細(xì)胞和其他一些細(xì)胞。

J-774A.1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：CEM-CCRF細(xì)胞、OCI-Ly 19細(xì)胞、PC12(高分化)細(xì)胞

WEHI 3細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NCI-H292細(xì)胞、Hs27F細(xì)胞、Clone 15 HL-60細(xì)胞

M4e細(xì)胞類似產(chǎn)品：：GBCSD細(xì)胞、JeKo 1細(xì)胞、H676B細(xì)胞

HUT125細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MLE 12細(xì)胞、P3X63Ag8653細(xì)胞、32D clone3細(xì)胞

D-341Med細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MT2細(xì)胞、hTERT-HPNE細(xì)胞、RPMI #8226細(xì)胞

HCC 70細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Nthy-ori 3-1細(xì)胞、SK-MEL28細(xì)胞、AC16 [Human hybrid]細(xì)胞

DU4475細(xì)胞類似產(chǎn)品：：LNCaP細(xì)胞、MT-4細(xì)胞、KTC1細(xì)胞

H295R-S1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：AU565細(xì)胞、AN3-CA細(xì)胞、HEK-2細(xì)胞

H-2228細(xì)胞類似產(chǎn)品：：VB細(xì)胞、KE-39細(xì)胞、KP-N-RT-BM細(xì)胞

293FT細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Panc327細(xì)胞、BC3 H1細(xì)胞、C4-2 B細(xì)胞

NCI-H740 Cell|人肺癌細(xì)胞

LAC細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SGC 7901細(xì)胞、CFSC-8B細(xì)胞、Panc 5.04細(xì)胞

EFM19細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HCC78細(xì)胞、MC3T3細(xì)胞、SKRC-52細(xì)胞

hFOB 1.19細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HTR8細(xì)胞、MiaPaCa2細(xì)胞、THP-1(ATCC)細(xì)胞

OCILY10細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HLF-a細(xì)胞、RSMC細(xì)胞、C3H10T1/2 clone8細(xì)胞

Roswell Park Memorial Institute 8226細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Clone Y1細(xì)胞、H-2087細(xì)胞、SRA 01/04細(xì)胞

RASMCs細(xì)胞類似產(chǎn)品：：U2932細(xì)胞、JIMT1細(xì)胞、SKNBE2C細(xì)胞

RASMCs細(xì)胞類似產(chǎn)品：：U2932細(xì)胞、JIMT1細(xì)胞、SKNBE2C細(xì)胞

WM-451Lu細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MD Anderson-Metastatic Breast-453細(xì)胞、H-1666細(xì)胞、LN-18細(xì)胞

HEI-193細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HNSC細(xì)胞、NIH:OVCAR-5細(xì)胞、NCI-H1819細(xì)胞

Hs-281-T細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NPC-TW01細(xì)胞、OVCA432_Bast細(xì)胞、HT 1080細(xì)胞

Hs-578T細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MV411細(xì)胞、SGC-996細(xì)胞、H-2126細(xì)胞

H-87細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Panc813細(xì)胞、Karpas299細(xì)胞、ZR75-30細(xì)胞

EB1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Colo320細(xì)胞、CCFSTTG1細(xì)胞、J774A1細(xì)胞

L6565細(xì)胞類似產(chǎn)品：：GM00637F細(xì)胞、MB157細(xì)胞、DU145細(xì)胞

COLO 699細(xì)胞類似產(chǎn)品：：TE671/RD細(xì)胞、UCD-MLA-144細(xì)胞、ZR-75-30細(xì)胞

H1651細(xì)胞類似產(chǎn)品：：OVSAHO細(xì)胞、LC-2-Ad細(xì)胞、SkChA1細(xì)胞

CEM.C1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：10RGB細(xì)胞、NCIH23細(xì)胞、MN-9D細(xì)胞

McA-RH 7777細(xì)胞類似產(chǎn)品：：H157細(xì)胞、Gerner 7666細(xì)胞、COR-L279細(xì)胞

CX-1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MIA-Pa-Ca-2細(xì)胞、BV-2細(xì)胞、GM03320細(xì)胞

KP-4細(xì)胞類似產(chǎn)品：：ES-2細(xì)胞、IR983F細(xì)胞、P-19細(xì)胞

AR4-IP細(xì)胞類似產(chǎn)品：：S3 HeLa細(xì)胞、Scott and White No. 13細(xì)胞、Rat Fetal Lung-6細(xì)胞

ROS17/28細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Immortalized Human Hepatocytes細(xì)胞、MC57G細(xì)胞、IGROV-1細(xì)胞

EB-1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SUP-M2細(xì)胞、CTLA4 Ig-24細(xì)胞、SUD6細(xì)胞

C42細(xì)胞類似產(chǎn)品：：LUDLU-1細(xì)胞、1E8-H細(xì)胞、PLA 802細(xì)胞

SKNMC細(xì)胞類似產(chǎn)品：：KU812-F細(xì)胞、BC-028細(xì)胞、CAL 39細(xì)胞

NIHOVCAR3細(xì)胞類似產(chǎn)品：：FL62891細(xì)胞、H2052細(xì)胞、MC-116細(xì)胞

RBL-1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：RBVEC細(xì)胞、Hs 604.T細(xì)胞、GM00215細(xì)胞

OKa-C-1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：RPMI-1788細(xì)胞、C33細(xì)胞、N-87細(xì)胞

SuDHL 10細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Madin-Darby Canine Kidney細(xì)胞、CATHa細(xì)胞、SK-MEL 28細(xì)胞

NCI-H740 Cell|人肺癌細(xì)胞

Mouse podocyte細(xì)胞類似產(chǎn)品：：PANC 813細(xì)胞、MEC-1細(xì)胞、L5178Y-R細(xì)胞

X63-Ag8.653細(xì)胞類似產(chǎn)品：：LU451細(xì)胞、H-196細(xì)胞、SHIN3細(xì)胞

108CC15細(xì)胞類似產(chǎn)品：：OAW 42細(xì)胞、BHP10-3細(xì)胞、RT 112細(xì)胞

H2172細(xì)胞類似產(chǎn)品：：alphaTC clone 6細(xì)胞、Med 341細(xì)胞、MKN74細(xì)胞

NCI-H358細(xì)胞類似產(chǎn)品：：OCI Ly3細(xì)胞、3T3F442A細(xì)胞、WPMY1細(xì)胞

SW 839細(xì)胞類似產(chǎn)品：：EL 4細(xì)胞、TT細(xì)胞、FU-97細(xì)胞

PTK2細(xì)胞類似產(chǎn)品：：JIII細(xì)胞、OVCAR3細(xì)胞、MDA-MB-435 S細(xì)胞

PE/CA-PJ34細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HIT-T15細(xì)胞、NS20-Y細(xì)胞、Hce8693細(xì)胞

PE/CA-PJ34細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HIT-T15細(xì)胞、NS20-Y細(xì)胞、Hce8693細(xì)胞

C2C12細(xì)胞類似產(chǎn)品：：OC 316細(xì)胞、COLO-HSR細(xì)胞、RPE D407細(xì)胞

NCI-H2195細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Menschliche Und Tierische Zellkulture-3細(xì)胞、HEK 293 EBNA細(xì)胞、VMCUB1細(xì)胞

COLO394細(xì)胞類似產(chǎn)品：：373 MG細(xì)胞、BE2-M17細(xì)胞、RGM1細(xì)胞

HBdSMC細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SUM 52細(xì)胞、IHH細(xì)胞、H526細(xì)胞

NUGC4細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HCEpiC細(xì)胞、IGROV-1細(xì)胞、TGW-nu-1細(xì)胞

Rat 1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HMrSV5細(xì)胞、NCI-H1792細(xì)胞、ACT-1細(xì)胞

GP-293細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Mo7e細(xì)胞、NCI-522細(xì)胞、LCMS細(xì)胞

GM00346細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-3細(xì)胞、BT474細(xì)胞、HFL-1細(xì)胞

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