G418,是一種與慶大霉素相關的氨基糖苷類抗生素,常用作真核細胞的篩選。作為硫酸新霉素的類似物,G418在真核細胞中干擾80S核糖體的功能以及蛋白質(zhì)的合成。
顯性作用的抗性基因(neor)的表達可篩選包含轉(zhuǎn)座子Tn601(903)或Tn5的哺乳動物表達載體。當表達抗性的哺乳動物細胞在含有G418的培養(yǎng)基中生長時,約10-14天內(nèi)產(chǎn)生穩(wěn)定的菌落。
產(chǎn)品性質(zhì)
形態(tài):白色粉末
融點:138~144℃
溶解性:溶于水、甲醇
CAS:108321-42-2
分子式 : C20H40N4O10·2H2SO4
分子量 :692.71
比旋: 104-121℃
水分: ≤10%
吸光值: ≤0.015 (280nm,1mg/ml), ≤0.1 (570nm, 100mg/ml)
儲運:室溫下運輸, 干粉在室溫下儲存,溶于水、甲醇,溶液于-20℃儲存。
質(zhì)量優(yōu)勢
1、提供純度>90%(HPLC)的產(chǎn)品,與其他低濃度G418產(chǎn)品相比,使用量更低,更有利于細胞生長
2、效價>700ug/mg
3、嚴格控制ED50值,保證各批次的一致性
使用方法
由于各真核細胞系對G418敏感度不同,需通過實驗確認各新細胞系或細胞株穩(wěn)定轉(zhuǎn)染時殺死非穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞所需用量。
最適用量通過建立細胞死亡曲線獲得。將細胞稀釋至1000cell/ml,每孔100ul加入有培養(yǎng)基的24孔板,將每孔中的G418濃度稀釋至0,100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1100ug/ml等12個級別, 培養(yǎng)10-14天,以最低細胞全部死亡濃度為基準,一般400-800ug/ml左右,篩選時比該濃度再高一個級別,維持時使用篩選濃度的一半即可。
濃度范圍參考
關鍵字: 108321-42-2;
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