"KMS-18 Cell|人漿細胞骨髓瘤細胞
細胞背景資料:漿細胞骨髓瘤;男性
細胞形態(tài):上皮細胞樣
【細胞培養(yǎng)中細菌、霉菌的污染情況總結】細菌:細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據感染細菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況,是否在GAO壓滅菌時放氣時間足夠,壓力足夠!尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品,連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染,一定要注意!下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象!可在培養(yǎng)液中加相應的抗生素處理;霉菌:培養(yǎng)液是清亮的,倒置顯微鏡下無雜質,37度孵箱培養(yǎng)2-3天,仍清亮,但出現(xiàn)絮狀雜質,鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,可看到明顯的菌絲,細胞仍可生長,但時間長之后,細胞的活力狀態(tài)變差,用酸銅溶液擦拭CO2孵箱內,再把水盤里也加上飽和量的酸銅?;蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒二鈉GAO鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后,可把所有細胞暫時轉移,采用擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。并把放置在孵箱內一個小時,使其蒸汽彌漫。待的氣味消散后,再移入細胞。孵箱應定期清潔(2月左右),尤其在多雨的季節(jié)。其它培養(yǎng)箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外燈照。預防霉菌污染,可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或D或雙抗;但細胞一旦污染,很難挽救,制霉菌素或D或雙抗都于事無補,建議舍棄該污染細胞,將環(huán)境徹底消毒,如果所有細胞都污染,可能是系統(tǒng)污染,檢查一下培養(yǎng)基和器材,如果只是個別污染,可能是操作問題,就要注意操作。
細胞生長:貼壁
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細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
KMS-18 Cell|人漿細胞骨髓瘤細胞
[細胞產品包裝]鮮活細胞:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞:1ml凍存管(兩支)
預防細胞污染的注意事項:實驗進行前,超凈臺用紫外燈照射30-60min,然后用75%酒精擦拭超凈臺臺面,并開啟超凈臺風扇運轉10min左右再開始實驗操作。實驗用品用75%酒精擦拭后才能放入超凈臺內;實驗用品用完應移出超凈臺,以利于氣流的流通。實驗完成后用75%酒精擦拭超凈臺臺面。每次操作只處理一種細胞;即使不同細胞使用相同的培養(yǎng)基也不要共享同一瓶培養(yǎng)基,避免細胞間的交叉污染。操作時小心取用無菌的物品,避免污染。勿碰觸吸管尖頭,不小心碰觸后應立即更換;不要在打開的容器瓶口正上方操作,容器打開后,傾斜45°操作,操作完成后及時蓋上瓶蓋。CO2培養(yǎng)箱的清潔是較易被忽視的地方,應1-2個月對培養(yǎng)箱定期進行清潔消毒。先用75%酒精擦拭培養(yǎng)箱內壁、隔板、水盤2-3次,用雙蒸水清洗,再用酒精棉球擦拭一遍,后紫外燈照射4h以上。水盤內加入無菌水(應每周更換),待培養(yǎng)箱內溫度、濕度、CO2濃度穩(wěn)定后再放入細胞。定期清洗或更換超凈臺過濾膜、預濾網。
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細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。
細胞來源說明:來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫
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細胞生長特性:半貼壁
細胞傳代比例:對于有限細胞系,傳代時以二、四、八或十六倍(傳代比率分別是2、4、8和16)降低細胞密度,計算群體倍增數更容易(即分別是傳代比率2對應1次倍增,4對應2次倍增,8對應3次倍增,16對應4次倍增);例如,一傳八的培養(yǎng)物需要3次倍增才能達到原來相同的細胞密度。脆弱的或生長緩慢的細胞系通常一傳二,而有活力的,生長快速的細胞系可以一傳八,甚至一傳十六。有些連續(xù)細胞系可一傳五十或一傳100。一旦細胞系變?yōu)檫B續(xù)細胞系(通常經過150次或200次倍增以上),細胞濃度是主要參數,培養(yǎng)濃度應降至10(4)/ml--10(5)/ml之間??蛇x擇傳代間隔合適的傳代比率或稀釋度,或許為1周或2周,同時要保證:細胞密度不可稀釋過低,使其延遲期合理(在24小時以內),可重新進入生長周期;而且在下次傳代前不進人平臺期。
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關鍵字: KMS-18 Cell|人漿細胞骨髓瘤細;
上海冠導生物工程有限公司,先后從ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、PromoCell、ScienCell、JCRB等國內外細胞庫引進細胞2000余株。以此為契機,公司組建了冠導細胞庫,我司細胞均由資深細胞培養(yǎng)工程師進行培養(yǎng)。我司可以提供的細胞有:①細胞系②原代細胞③穩(wěn)轉株④耐藥株⑤標記細胞⑥細胞配套試劑等。